鸡毒支原体热休克蛋白DnaK免疫反应原性的鉴定及应用.docVIP

鸡毒支原体热休克蛋白DnaK免疫反应原性的鉴定及应用 王莉莉 于艳超 周长平 赵雅芝 潘巧 张琳 郝文君 王秀梅 辛九庆 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病/动物支原体病创新团队 吉林农业大学动物科技学院 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 本文主要研究了重组蛋白Dna K (rDnaK) 的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值。将已构建的含有鸡毒支原体 (MG) DnaK基因的重组质粒pET-30a-DnaK进行原核表达纯化, 以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗, 进行Western blot分析, 鉴定rDnaK的免疫反应原性, 结果显示rDnaK与MG的阳性血清发生特异性反应, 与MG的阴性血清无反应条带, 表明rDnaK具有较好的免疫反应原性。将其作为包被抗原包被酶标板, 用HRP标记的兔抗鸡Ig G作为酶标二抗, 分别对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度及工作时间等反应条件进行了优化, 建立了一种稳定检测鸡毒支原体 (MG) 抗体的间接ELISA方法, 并且与商品化的试剂盒比较结果显示, 该方法的特异性性为95.4%, 敏感性为92.6%。交叉反应性试验表明包被抗原rDna K不与NDV、IBV、ILTV等几种常见的禽呼吸道疾病的阳性血清发生交叉反应。抗体持续期试验结果显示该方法最早能在鸡群免疫MG疫苗后一周检测到MG抗体, 说明该诊断方法适用于MG感染的早期检测。采用该方法检测了来自全国五个省份的568份临床样品, 其结果表明MG的流行率在23%～51%之间, 对我国MG的流行状况做了初步的调查。 关键词： 鸡毒支原体; DnaK; 免疫原性; 间接ELISA; 作者简介：王莉莉 (1989-) , 女, 河南商丘人, 硕士研究生, 主要从事动物支原体致病机理和诊断方法的研究. 作者简介：王秀梅, E-mail:xmwang99@163.com; 作者简介：辛九庆, E-mail:xinjiuqing2001@126.com 收稿日期：2017-11-21 基金：基金项目:2017兽医生物技术国家重点实验室动物支原体创新团队经费 Identification of the immunogenicity and application of the heat shock protein DnaK of Mycoplasma gallisepticum WANG Li-li YU Yan-chao ZHOU Chang-ping ZHAO Ya-zhi PAN Qiao ZHANG Lin HAO Wen-jun WANG Xiu-mei XIN Jiu-qing Innovation team of Animal Mycoplasma Disease, Division of Animal Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Science; College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University; Abstract： The main aim of this reserach was to study the immunogenicity of rDnak and the application value as coating antigen in ELISA. The rDnak of mycoplasma gallisepticum (MG) was expressed in E.coli with the recombinant plasmid pET-30 a-Dna K. The product was analyzed by Western blot with MG positive and negative serum and the result showed that it had a strong immunogenicity with positive serum and could not react with negative serum. Then the purified rDnak was used as coating antigen for ELISA and