丝状菌发酵过程中菌体形态变化.docxVIP

与3丝状菌发酵过程中菌体形态变化专 题 评 论赵树欣欧宇( 天津科技大学食品科学与生物工程学院 ,天津 ,300222)摘 要 借助图像分析系统可以对丝状菌发酵过程中菌丝体面积 、菌丝体几何特性 、絮状物群体 、细胞体积等进行特征化描述 ,并建立量化菌体形态的方法 。文中还介绍了利用计算机 识别方法进行菌种的分离筛选 ,以及操作参数与菌体形态的关系 。关键词 发酵 , 菌体形态 , 计算机识别为提高微生物发酵的效率 ,人们首先想到的是 改 良 菌 株 。无 论 是 采 用 基 因 工 程 方 法 ,还是采用传统的诱变育种方法均可有效 地提高菌种的目的产物的生产能力 。从发酵 过程研究着手 ,通过发酵机制与相关影响参 数的研究 ,也可有效提高发酵产率 。从已有发酵过程研究来看 ,多是通过发酵过程相关 操作参 数 的 优 化 , 来 提 高 产 物 的 生 产 能 力 。 事实上 ,微生物的形态特征及生理活性状态 与微生物的代谢产物生产能力关系甚密 。虽 然 ,早在 20 世纪 60 年代 ,人们已开始进行微生物深层发酵中菌体形态与产物生成之间相 互关系的描述 ,但是由于缺乏有效的可视化 工具 ,菌体形态不能被特征性描述 ,因此 ,影 响菌体形态的因素与菌体形态之间还不能建 立定量关系 ,仅能从经验的角度来说明 。对于微生物发酵与菌体形态变化之间的 关系 ,随着计算机技术与生物技术的发展 ,给 人们提供了新的认识空间 。特别是菌体形态 与相关影响因素 、操作方式的相互关系 ,形态 动力学 研 究 以 及 与 形 态 相 关 基 因 方 面 的 工作 ,丰富了相关发酵过程研究的理论 。为此 , 本文从丝状菌菌体形态的量化 ; 操作参数与 菌体形态之间的相互关系 ; 菌体形态与生理 生化参数之关系等作一简要介绍 。1菌体形态的量化描述采用计算机图象识别方法研究微生物形态 ,需对菌体形态进行量化描述 。首先将经显微镜放大的菌体形态通过 CCD 摄象机和 图象采集卡 , 将菌体形态图象转化为 512 ×512 ×8bit 格式 ( 或其他) 的数字化图象 。然 后通过二值细化方法等对图象进行测量 、分析和比较 。一般 ,将丝状菌的菌体形态分为分散状 、 交织状和菌丝团 3 大类 。为便于定量描述丝状菌的这种形态 , Tho mas1 对菌体形态参数 定义如表 1 所示 。由于微生物种类繁多 ,生长过程复杂 ,这 些定义在使用中常常要适度修正 。例如 ,在弗氏链霉菌 ( S t re ptom yces f ra di ae) 生产泰乐 菌素过程中 ,如果采集到的图像中有 1 个球形圆核 ,这可很简单地定义其为菌丝球 。相反 ,如果没有菌丝球 ,形态仅呈现菌丝或交织 在一 起 的 菌 丝 时 , 情 况 就 显 得 复 杂 起 来 。Tamura 等人2 针对这 2 种状态 ,利用统计学方法针 对 泰 乐 菌 素 发 酵 过 程 中 所 采 集 到 的250 幅图象进行分析 ,提出可利用 M a 和 M p这 2 个参数来进行区分 , M a 为菌丝体面积 , M p 为 菌 丝 体 凸 面 的 周 长 。如 果 M a/ M p2≥ 01014 和 M p ≥ 420 , 所得图像可以分类 为交织状菌体形态 ; 如 果 M a/ M p2 ≤01014第一作者 :学士 ,副教授 。3 天津市科委自然科学基金重点资助项目 ( No . 013609911)收稿日期 :2002 - 01 - 1173综 述 与 专 题 评 论Vol128 No18食品与发酵工业Food and Fermentatio n Indust ries菌体形态的分界点就是 M a/ M p2 和 M p 分别等于 01014 和 420 。和 M p ≤420 , 所得图象可以分类为分散状菌体形态 。作为区分交织状菌体形态和分散状表 1 图形分析的菌体形态参数形 态参数定义菌丝长度分枝长度 菌丝宽度 分枝频率 顶端数 菌丝生长单位菌丝体中菌丝的长度各分枝菌丝的长度 菌丝的宽度 丝状体中的分枝数量 分枝数加 2 菌丝长度被顶端数除分散 状 ( dispered fo r m o r filamento usfo r m)凸面外轮廓周长凸面面积 紧密度 粗糙度周边长度凸面 ( 外轮廓) 周长所围面积 菌团中菌丝的实际面积被菌团去除 所测菌团外部的不规则性交织 状 ( clump s o r entangled filamen2to us fo r m)菌球的周长与面积菌球的面积比同“交织状”中定义菌球中实心部分所占总球面积的比率菌丝球 (pellet s)有许多研究是借助图像分析系统来对菌丝体面积 、菌丝体几何特性 、絮状物群体 、细 胞体积