普鲁兰酶产生菌的筛选及诱变技术研究_cropped.doc

 吉林农业大学学报 2007 ,29 (3) :343～346 J ournal of J ilin A gricultural University http :/ / xuebao . jlau . edu . cn E2mail : jlndxb @vip . sina . com Ξ 普鲁兰酶产生菌的筛选及诱变技术研究 闵伟红 1 , 刘 艳 1 , 沈淑杰 1 , 任惠杰 2 , 张锦玉 2 (1 . 吉林农业大学食品工程学院 , 长春 130118 ; 2 . 长春职业技术学院食品与生物技术分院 , 长 春 130033) 摘 要 : 从土壤中筛选出 1 株普鲁兰酶产生菌 ,经过紫外线诱变及紫外线 —甲基磺酸乙酯复合诱变后 ,从大 量突变株中筛选出 1 株稳定产普鲁兰酶的菌株 。诱变育种最佳条件为紫外线照射时间 2 min ,菌浓度 104 ; 甲 基磺酸乙酯 (体积分数 10 mL/ L) 处理 50 min 。酶活力由出发菌的 2. 06 U/ mL 提高到 9. 37 U/ mL ,比国内报道的 最高值 8. 8 U/ mL 高出 0. 57 U/ mL 。 关键词 : 芽孢杆菌 ; 筛选 ; 诱变 ; 普鲁兰酶 中图分类号 : TS 20113 文献标识码 : A 文章编号 : 100025684 (2007) 0320343204 Study on Screening and Mutation of Pull ulana se Producing Bacteria MIN Wei2ho ng1 , LIU Ya n1 , SHEN Shu2jie 1 , REN Hui2jie 2 , ZHAN G J in2yu2 (1. College of Food Engineering , J ilin A gricultural University , Changchun 130118 , China ; 2. College of Food and Biotechnology , Changchun College of Vocational Technology , Changchun 130033 , China) Ab stract : A productive and stable pullulanase bacillus was screened from numerous mutated strains after one strain of bacillus separated from soil had been induced to go through mutation under ultraviolet ray and compound mutation under ultraviolet ray2methyl sulfonic acid ethyl ester . The optimum conditions are : ultraviolet irradiation time 2 min , bacterium density 104 , ethylmethane sulfonate density 10 mL/ L , treatment for 50 min , and enzymatic activity improved from 2 . 06 U/ mL to 9 . 37 U/ mL . The result ex2 ceeds the highest domestic report by 0 . 57 U/ mL . Key wo rd s : bacillus ; screening ; mutation ; pullulanase 普鲁兰酶为淀粉酶类 ,主要应用于以淀粉为 原料的食品工业中 。在以淀粉为原料的工业生产 中 ,淀粉的彻底分解直接影响其利用率 。工业上 使用的淀粉由支链和直链淀粉构成 ,其中支链淀 粉的含量占 75 %～85 %1 22 。普鲁兰酶能专一性 地分解支链淀粉分支点的α21 ,6 葡萄糖苷键 , 剪 下侧枝形成小分子 ,可以显著提高淀粉原料的利 用率 ,从而提高生产效率 ,目前已经较成功地应用 于高葡萄糖浆 、高麦芽糖浆 、低聚寡糖浆和啤酒生 诱变及紫外线 —甲基磺酸乙酯复合诱变方法 ,筛 选出 1 株产普鲁兰酶较稳定的突变株 ,可为下一 步发酵工艺研究提供优良菌株 。 材料与方法 1 1 . 1 试验材料 1 . 1 . 1 菌株 试验用出发菌株分离自吉林省长 春市金成淀粉厂附近的土壤中 。 1 . 1 . 2 培养基 液体培养基 : 糯米淀粉 10 . 0 g , 蛋白胨 5 . 0