ht29、hm7大肠癌细胞株中atmpi3k区基因突变的检测.docVIP

精品论文 参考文献 HT29、HM7大肠癌细胞株中ATMPI3K区基因突变的检测 延边大学附属医院 吉林延吉 133000 摘要：目的：探讨HM7和HT29两种细胞间存在放射敏感性差别的机制。方法：应用RT-PCR方法获得HM7、HT29中毛细血管扩张性共济失调症突变基因（Ataxia telangiectasia-mutated gene，ATM gene）编码序列主要功能区PI3K区（8577nt-9122nt）546bp片段，经荧光标记ddNTPs循环测序法进行突变检测。结果：在HM7和HT29的细胞株中，均未发现ATM/PI3K区域的序列突变。结论：在HM7和HT29两种大肠癌细胞株间的放射敏感性的差别是由我们所测的ATM/PI3K区域序列突变之外的因素引起。 关键词：HM7；HT29；ATM基因；辐射敏感性 ABSTRACT Objective：To investigate the mechanism of the difference between the two cell types of HM7 and HT29.Methods：Reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）method was used to obtain the gene fragment of the main functional region of PI3K region（8577nt-9122nt）546bp，which was encoded by Ataxia telangiectasia-mutated（ATM）gene in the cells of HM7 and HT29.The ddNTPs cycle sequencing with fluorescence labeling was used to detect the mutation of gene.Results：In HM7 and HT29 cell lines，the sequence mutation of ATM/PI3K region was not found.Conclusion：The differences in the radiation sensitivity between the HM7 and HT29 cell lines may be caused by some other reasons except the mutations in the ATM/PI3K region. KEY WORDS HM7 HT29 Ataxia telangiectasia-mutated gene Radiosensitivity 结肠癌细胞中，HM7和HT29两种细胞分别来自低分化的结肠癌组织和高分化的结肠癌鳞状上皮组织。我们在此前的实验中，应用集落形成法求得辐射生物学参数D0，Dq，MID，SF2值，实验结果表明HT29比HM7对放射线更为敏感[1]。这两种细胞间存在的放射敏感性差别，其机制如何？这是我们要探讨的问题。已经知道磷酸肌醇激酶-3（phosphafidylinositol-3k Lnase，PI3K）基因家族成员ATM基因在识别DNA损伤、信号转导通路以及调控细胞周期中起着非常重要的作用[2]。在ATM基因中PI3K功能区的突变将会导致细胞对放射的敏感性的变化[3]。大肠癌细胞中HM7和HT29细胞株放射敏感性的差异是否与ATM基因PI3K功能区有关，尚未见报道。我们采用荧光标记的双脱氧核糖核苷三磷酸（ddNTP）循环测序法对HM7和HT29细胞株的ATM/PI3K区域序列进行突变检测，研究他们之间的相关性。 材料与方法 1 细胞株 人大肠癌细胞株HM7、HT29由韩国忠南大学校医科大学分子生物学教研室提供。用含10%小牛血清（国产）DMEM培养基（Gibco公司）在37℃、5%CO2培养箱常规培养。 2 研究方法 2.1 引物的合成和设计：我们使用的引物的基因序列是：上游5-cagtgcctttcagtgcc-3，下游5-gtttcatettccggcctctg-3，由上海生物工程技术服务有限公司合成。而引物的设计方面，是使用了Primer 5.0软件，进而设计了针对ATM基因在PI3K功能区546bp（8578nt～9123nt）的引物，我们的依据是GenBankDatabase提供的ATM基因的mRNA序列。 2.2 RNA提取操作和RT-PCR：采用Triz