丙泊酚尾静脉泵注对bmsc移植修复大鼠脊髓损伤下肢运动功能的影响.docVIP

精品论文 参考文献 丙泊酚尾静脉泵注对BMSC移植修复大鼠脊髓损伤下肢运动功能的影响 河北医科大学附属邢台市人民医院 054001 【摘 要】目的：观察丙泊酚尾静脉泵注对BMSC移植修复大鼠脊髓损伤的影响。方法：成年Wistar大鼠80只，建立脊髓损伤模型，通过随机数字表法分为2组。BMSC移植组：经尾静脉泵注等体积BMSC细胞液。联合组：尾静脉泵注等体积BMSC细胞液后，再经尾静脉泵注丙泊酚注射液（2 ml?kg?h-1）持续4 h。分别于造模前、造模后1天、3天、1 周、2 周、3 周、4 周通过BBB评分、斜板试验、改良Tarlov 评分进行运动功能评定。结果：造模后，大鼠下肢运动功能评价联合组优于BMSC移植组。结论：丙泊酚尾静脉泵注能促进移植的BMSC在脊髓损伤区的存活及向神经功能细胞分化，提高BMSC移植修复大鼠脊髓损伤的效果。 【关键词】BMSC；丙泊酚；大鼠；脊髓损伤；移植；治疗；修复 随着经济水平的提高及道路交通现代化的发展，脊髓损伤的发生率日趋升高，具有着发病急，病情重，致残率、致死率高，预后差等特点，如何在临床工作中有效治疗脊髓损伤，降低致残率及死亡率，达到最佳功能康复，改善患者预后仍然是一个困扰着神经外科医生的重大难题。近期众多研究指出骨髓间充质干细胞（bone marrow stem cells，BMSCs）在一定条件下能诱导能化为各种神经功能细胞，移植后起到修复神经损伤的作用，为临床治疗脊髓损伤提供了新的思路。临床应用及基础实验表明丙泊酚是具有神经保护作用的麻醉药物，其在脊髓损伤治疗中的应用引起研究工作者的关注。本研究探讨丙泊酚尾静脉泵注对移植BMSC修复大鼠脊髓损伤的影响。 1 材料与方法 1.1 实验动物和主要试剂 1月龄Wistar大鼠一只（雌雄不限），成年健康Wistar大鼠（雌性，体重200-250g）80只，[许可证号SCXK（冀，购自河北省实验动物中心； 1.2 大鼠BMSC的培养及鉴定 一只1月龄的Wistar大鼠处死后，侵入75%的酒精容器中彻底消毒，约10min。无菌操作下取大鼠双侧胫骨及股骨，切除两侧骨端，通过1ml的DMEM完全培养基（含5%胎牛血清）自一端冲洗骨髓腔，制成单细胞悬液，接种于100 ml的培养瓶中，细胞数为3times;104个/ml，于饱和湿度的孵育箱中培养（37℃、5%的CO2），24 h后行全量换液，3 天换液1次并按1： 2的比例进行传代。每日显微镜观察细胞的生长情况，细胞融合到80%以上时，进行再次传代，按1：3比例进行。经多次传代培养扩增后，BMSC逐渐纯化。通过流式细胞仪法检测表面抗原鉴定BMSCs。 1.3动物模型的建立及分组： 选择雌性Wistar大鼠80只，体重200-250g，实验室饲养2周后，10%的水合氯醛按350mg/kg腹腔注射麻醉，俯卧位将大鼠固定在实验平台上，腰背部备皮满意后，按T8～9棘突为切口中心，自大鼠背部正中逐层切开，充分显露T7～10的棘突和椎板，咬除T8～9棘突和部分椎板，暴露硬膜保持完整，作为损伤区。按照改良的Allen法打击，将10 g重物由2.5 cm高度处自由落下，撞击大鼠硬膜及脊髓组织（造模后大鼠尾巴痉挛摆动且双下肢瘫痪表明成功）。用双氧水冲洗伤口，逐层缝合背部切口。造模后每日挤尿2-3次，直至大鼠恢复排尿反射。 动物分组：随机数字表法分为40只/组，共2组。建模后6h通过1ml注射器经尾静脉注入不同移植液：BMSC组为注射1ml rBMSC（3times;l06个）悬液移植组。联合组：在尾静脉注射1ml rBMSC（3times;l06个）悬液的同时通过尾静脉留置针持续泵注丙泊酚注射液（2 ml?kg?h-1）持续4 h。 下肢运动功能评价：所有大鼠均在造模前、及造模后1天，3天，1周，2周，3周，4周对4组大鼠进行运动功能评定。评定项目包括改良Tar-lov评分，BBB评分，斜板试验。评定时间均统一为上午8：00开始。评分均为两人合评。采取双盲法对4组大鼠进行评分，分别于术前、及造模后1天，3天，1周，2周，3周，4周对4组大鼠进行测定，共检测6次，取均值。 1.4 数据分析 以均数士标准差（?? 士s）表示数据，实验数据用SPSS 17.0软件分析，多组均数比较用单因素方差分析（LSD法），两组均数比较用t检验。 2 结果 2.1下肢运动功能评价结果 造模前所有大鼠的BBB评分、斜板试验及