生物化学---第十二章　DNA复制　RNA转录.ppt

核酸的生物合成 教学大纲 了解:真核细胞与原核细胞DNA复制的不同：DNA损伤的类型及损伤后的修复；原核生物转录的基本过程；转录后加工、反转录和核酶的概念；RNA干扰技术及基因治疗相关内容(加) 掌握：DNA合成的方式------半保留复制；合成特点：半不连续复制； DNA复制的过程所需要的物质(酶，尤其是原核生物-大肠杆菌DNA聚合酶的种类及作用，掌握其他(复制所需要的)酶或蛋白需要名称及种类，了解其功能)；掌握原核生物转录的基本过程、概念和特点； 重点、难点：DNA合成的方式—半保留复制；DNA复制的过程(前导链与滞后链的合成异同点及所需要的酶)；掌握转录与复制的异同点。RNA剪接及加工过程(以前是了解内容) 第一节 DNA的生物合成 一、DNA复制方式 二、参与DNA复制的因子 三、DNA复制过程 四、逆转录 五、DNA损伤的修复 DNA半保留复制的证据 几个相关概念： 1. 复制起始点 (origin, ori) 原核生物只有一个复制起始点； 真核生物染色体DNA有多个复制起始 点，同时形成多个复制单位， 两个起始点 之间的DNA片段称为复制子(replicon)。 2. 复制叉 (replication fork) 复制时双链打开，分开成两股，新链沿 着张开的模板生成，复制中形成的这种Y 字形的结构称为复制叉。 二、 原核生物DNA复制的参与因子 1.底物 dNTP (dATP, dGTP, dCTP, dTTP) 2.聚合酶 DNA聚合酶I 、II、III 3.模板　单链的DNA母链 4.引物　寡核苷酸引物（RNA) 5.其他酶和蛋白质因子 解链酶，解旋酶,单链结合蛋白，连接酶　　 （一）DNA聚合酶的活性 5′至3′的聚合活性 5′→ 3′方向 核酸 外切酶活性 5′→ 3′外切酶活性 3′→ 5′外切酶活性 5′至3′的聚合活性（ 5′→ 3′ ）  核酸外切酶活性 3′→5′外切酶活性 5′→3′外切酶活性 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 （二）DNA拓扑异构酶(解旋酶） 既能水解，又能打断碱基互补配对的氢键 拓扑酶Ⅰ 切断DNA双链中的一股 拓扑酶Ⅱ 切断DNA双链 （三）解链酶 使复制差前方的双链截开一小段 （四）单链DNA结合蛋白（SSB） 维持模板处于单链状态 保护单链的完整 (五)引物酶 是RNA聚合酶，合成一段RNA引物 （六） DNA连接酶（ligase） 催化两段DNA之间的连接 三、DNA的复制过程 （一） 复制的起始 1. DNA复制的起点 原核生物从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制 2.复制叉的形成 复制叉----复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构。 3.起始的过程 3.半不连续复制 三 复制的终止 复制有终止信号 polⅠ 5′→ 3′外切酶活性水解引物 polⅠ聚合活性填补空隙 DNA连接酶连接缺口。 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA忠实性的保障 复制的忠实性 DNA聚合酶的校对功能 DNA聚合酶的校对功能 起始时以RNA作为引物的作用 三、真核DNA的复制合成 DNA复制过程 端粒酶（telomerase） 端粒合成的一种模型 真核和原核DNA细胞复制比较 五、 DNA的损伤修复 突变可分为： 自发突变、人工诱变 突变的意义 突变是进化、分化的分子基础 只有基因型改变的突变 致死性的突变 突变是某些疾病的发病基础 二、引发突变的因素 三、突变分子改变的类型 错配 （点突变） 一个碱基改变 缺失、插入和框移突变 片段插入或缺失 重排 较大片段重组或重排 四、 损伤的修复 损伤--复制过程中发生的DNA突变 光修复 切除修复 重组修复 SOS修复 （一）光修复 紫外光照射可使相邻的两个T 形成二聚体 光修复酶可使二聚体解聚为单体状态，DNA完全恢 复正常。光修复酶的激活需300-600μm波长的光。 （二）切除修复 参与的酶有 核酸内切酶，polⅠ　,DNA连接酶 （三）　重组修复 重组蛋白RecA，polⅠ，连接酶参与　　 损伤会保留下去 （四）　SOS修复 DNA损伤面太大，复制难以继续。 通过SOS修复，复制有可能继续，细胞 有可能存活，但SOS修复机制的特异性低， 对碱基的识别、选择能力差、错误多。