人参中一种糖蛋白的分离、纯化、分析及结构的初步研讨.pdfVIP

摘 要 人参在我国有着悠久的药用历史，具有许多生理活 性，本文根据前人以往的研究经验，结合近年来新的色 谱技术对人参中一种均一的糖蛋白LRC从分离、纯化、 定性、定量检测及结构的初步鉴定等方面进行了较为系 统的研究。 本专题包括了五个部分的内容:第一部分:在正确 测得分子量分布范围及等电点分布范围的基础上，运用 分子筛及离子交换的原理从人参药材中分离、纯化得到 一种均一的糖蛋白，建立了入KTAFPLC快速蛋白液相纯 化系统快速分离、制备人参糖蛋白的方法，为今后的此 类工作做了有益的尝试;第二部分:利用毛细管区带电 泳法 (CZE)、高压柱层析法 (HPGPC)、毛细管凝胶电泳 法 (CGE)、毛细管等电聚焦 (CIEF)、聚丙烯酞胺凝胶电 泳法五种目前最为常用的分析手段鉴定其纯度;结果发 现毛细管区带电泳法(CZE)及毛细管凝胶电泳法(CGE), 毛细管等电聚焦法 (CIEF)、具有较高的分辨率，检测出 在高压柱层析法 (HPGPC)中未曾检测出的微量杂质。但 由于目前实验条件的限制，尚不能在此制备过程中将此 微量杂质去除;第三部分:比较了高效凝胶色谱法 (HPGPC)、毛细管凝胶电泳法(CGE)(常规法和Ferguson 法).MALDI-TOF-MS法四种方法测得的分子量之间的差 异;结果认为除MALDI-TOF-MS法为目前最准确测得的分 子量外， Ferguson法法是最接近于其真实值的测定方 法;第四部分:在人参糖蛋白的化学组成成分分析研究 中分别采用苯酚一硫酸法测定了糖部分的含量，氨基酸 分析法测定了氨基酸组成及蛋白部分的含量，结果发现 本糖蛋白是一个以蛋白为主的提取物，约占60%,氨基 酸组成分析表明，样品有17种人体所必需的氨基酸，其 富含酸性氨基酸 (Asx和Glx),Asx,Glx约占氨基酸残 基总量的23%，这与其等电点酸性相符合;采用TLC法 及GC法测得的单糖组成及分子比例显示，其四种糖的摩 尔比为Rha:Ara:Glc:Gal=l.00:3.45:0.612:5.03; 第五部分:根据p一消除反应前后紫外吸收图谱对比及苏 氨酸和丝氨酸的含量对比，测得了糖肤键为苏氨酸连接 的0一型糖肤键;通过碱降解前后的IR图谱对比，确定 了本糖蛋白糖链部分具有乙酞基团。IR和NMR的结果表 明单糖结构为a一毗喃型。 本课题建立的方法，可为其他植物建立糖蛋白的提 取、分离、纯化及分析提供参考。 关键词:人参 人参糖蛋白 分离、纯化 定性、定量 结构测定 Abstract Panaxginsenghaslongpharmacologicalhistory inourcountry.Ithasa lotofphysiological activity.Accordingtotheformersresearchworks, and by taking new chromatograph techniques recently， asystemresearchhasbeentakenin isolation,purification,qualitation,quantitation inspectionandelementarystructureelucidationof onehomogenousglycoproteinLRCin Panaxginseng. Thisthesisincludefivesections.First,base ondeterminationofmoleculeweightsrangandpI rangeofsample1andsample2,thetheoryofsize exclusionandion-exchangewereadaptedtoisolate andpurifyonehomogenousglycoproteinLRCfromthe rootofPanaxginseng.Amethodoffastisolation andpreparation ofglycoconjugate fromPanax ginsenbyAKTA FPLCfastproteinliquidpurify systemwassetup.Itisbeneficialattempttothis sortofworkinthefuture.Second,th