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微量超氧化物歧化酶邻苯三酚_Vc测活法
( )
第 20 卷 第 1 期 河北大学学报 自然科学版 Vol. 20 No . 1
2000 年 3 月 Journal of Hebei U niversit y Mar. 2000
微量超氧化物歧化酶邻苯三酚/ Vc 测活法
王会文 , 刘建荣 , 静天玉 , 赵晓瑜
(河北大学 生物工程研究所 , 河北 保定 071002)
摘 要 : 在 Vc 终止剂法的基础上 ,邻苯三酚的加入量由终浓度 2 mmol/ L 降低为 0. 05 mmol/ L ,并提
高反应溶液的 H 值至 8. 6 , 从而提高了 SOD 活力测定的灵敏度。使用本方法在 SOD 样品最大加入量
p
1 mL 时 ,最低可检测到 3. 3 ×10- 8 mol/ ( s ·mL ) SOD , 比Vc 终止剂法灵敏度提高 4 倍。
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关键词 : 超氧化物歧化酶 SOD ; 邻苯三酚 ; L - 抗坏血酸 Vc
中图分类号: Q 55 文献标识码 :A 文章编号 :1000 - 1565 (2000) 01 - 0061 - 02
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超氧化物歧化酶 SOD 在食品、化妆品、饮料等行业得到广泛应用。由于很多产品中 SOD 加入量很少 ,
常规方法无法准确测定其单位活力。本文对 SOD Vc 终止剂测活法[1 ] ( 以Vc 为终止剂改进的邻苯三酚自氧
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化法 进行改进 , 建立一种简便、灵敏的工业产品的质检方法 微量 Vc 终止剂法 : 通过降低反应体系中邻
苯三酚的终浓度 ,提高反应体系的 H 值和改用 5 cm 光径比色杯 ,提高本方法的灵敏度。Vc 终止剂法在最
p
大加样量 1 mL 时最低可检测 SOD 活力 1. 5 ×10- 7 mol/ ( s ·mL ) ,而微量 Vc 终止剂法最低可检测 SOD 活
力为 3. 3 ×10- 8 mol/ ( s ·mL ) 。
1 试剂与仪器
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45 mmol/ L 邻苯三酚溶液 分析纯并升华纯化 , 用 0. 05 mol/ L HCl 配制 ; 50 g/ L Vc 水溶液 ;
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巴比妥- HCl 缓冲液 p H 8. 6 40 mmol/ L 巴比妥- HCl ,1 mmol/ L 二乙三氨五乙酸 。
721 分光光度计为上海第三分析仪器厂生产;超级恒温器为重庆实验设备厂生产。
2 方法
2. 1 自氧化率的测定
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同Vc 终止剂法反应过程相同 ,只是在邻苯三酚加入量和反应缓冲液上不同 表 1 。微量Vc 终止剂法
具体操作如下 :
在 20 mL 试管中加 9 mL 巴比妥-
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