KIAA0101 mRNA在诊断食管癌中的价值研究.docVIP

精品论文 参考文献 KIAA0101 mRNA在诊断食管癌中的价值研究 永州市中心医院北院心胸血管外科 湖南永州 425000 【摘 要】目的 探讨KIAA0101 mRNA在食管癌患者全血中表达的临床病理学意义。方法 本研究选取了连续纳入36个月内在永州市中心医院北院就诊的77例被确诊为食管癌的患者，30例食管平滑肌瘤患者和40例健康志愿者被选入对照组。采集所有患者和对照组受试者全血并用EDTA抗凝，采用实时定量PCR技术检测KIAA0101 mRNA表达。结果 与对照组受试者相比，食管癌组患者KIAA0101 mRNA高表达。KIAA0101 mRNA高表达与远端转移，分期晚密切相关。KIAA0101 mRNA的灵敏度和特异性均优于CYFRA21-1（细胞角化素蛋白片段）和 CEA（癌胚抗原）。结论 KIAA0101 mRNA能够用于食管癌诊断和预后预测。 【关键词】KIAA0101；食管癌；甲胎蛋白；癌胚抗原 引言 食管鳞状细胞癌（以下简称食管癌）是全球发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，其5 年生存率小于30%。其发生与亚硝胺的慢性刺激、饮水、粮食蔬菜中微量元素的含量、炎症与创伤以及遗传因素有关［1］。KIAA0101是分子量为15 kDa的蛋白质，含有增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的保守结合结构域，并参与DNA修复调控、细胞周期进程、细胞凋亡和细胞增殖[2]。本研究旨在探讨KIAA0101 mRNA在食管癌患者全血中表达的临床病理学意义。 1 研究对象与方法 1.1 研究对象 77例食管癌患者和30例食管平滑肌瘤患者的石蜡组织标本，收集自2000年1月至2004年12月就诊于永州市中心医院胸外科实施手术的患者。所有患者术前均未行化疗或放疗，均有完整的临床病理资料。 1.2 单核细胞分离 应用密度梯度离心法，从4 mL肝素抗凝外周血中提取单核细胞。用生理盐水稀释外周血至8 mL，分装至2个EP管，各加人2 mL淋巴细胞分离液后以900g离心。室温孵育30 min后，外周血单核细胞便处于中间层。吸取中间层细胞，于离心管中稀释至10 mL，离心2次，并在每次离心后室温孵育10 min。移除上清后，将外周血单核细胞于-70#730;C保存。 1.3 KIAA0101 mRNA的扩增 采用美国Invitrogen公司生产的Trizol试剂盒提取外周血单核细胞中RNA。主要过程为：95#730;C预变性5 min，37#730;C逆转录 30min，94#730;C变性35 S，56#730;C退火45 S，72#730;C延伸60S，共35个循环，72#730;C末延伸7 min。GAPDH mRNA作为内参。KIAA0101 mRNA的扩增引物为：上游引物5rsquo; - GTGCAGGGTCCGAGAAAGT -3rsquo;；下游引物5rsquo;-GTcGTATccAGTGcAGGGTccGAGGT-3rsquo;。期望的产物大小为525 bp。GAPDH mRNA的扩增产物为：上游引物5rsquo;- GCAACCCGTAGATCCGAACTTT -3rsquo;；下游引物5rsquo;- ATTCGCACTGGATACGAAAC-3rsquo;。期望产物大小为408 bp。扩增产物用2％凝胶电泳分离。302 nm紫外线下观察分离产物。KIAA0101 mRNA表达= KIAA0101 mRNA光密度/GAPDH mRNA光密度。 1.4 统计分析 结果表示为平均值plusmn;标准差（SD）。使用卡方检验、t检验或单因素方差分析进行组间比较。逐步逻辑回归法分析不同因素对KIAA0101 mRNA表达影响。受试者工作特征曲线用于预测临界值，计算标记物灵敏度，特异性，阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。所有检验均为双侧检验，p lt; 0.05具有统计学差异性。使用SPSS 19.0软件包（SPSS，Inc.，Chicago，IL，USA）分析数据。 2 结果 2.1 患者一般特征 3 讨论 本组77例食管癌患者中有52例（67.5%）KIAA0101 mRNA高表达。本结果与Cheng Y等[3]研究结果类似，Cheng Y等研究表明HCC患者中KIAA0101 mRNA和蛋白1的阳性表达率分别为61%和 64%。 与食管癌组中67.5%的患者KIAA01