人红细胞摄取Mnlt2gt及MnCitltgt的动力学和机理的研讨.pdfVIP

人红细胞摄取_n2+及田n(Cit)】一的动力学和机理的研究+ 李荣昌” 高岩 (北京大学药学院化学生物学系，北京，100083) 早期金属离子的跨细胞膜输运研究主要集中于K、Na、ca、Mg、等人体必需常量元素。最近 0 r Mn属人’ 属元素如稀土离子ce、Eu、Tb等的跨细胞膜输运的动力学和机理日益引起人们重视”。…I 体必需微量元素，它不仅是许多酶，如精氨酸酶、丙酮酸羧化酶、超氧化物歧化酶的重要成份， 而且上百种酶需要锰激活。在成人全血中锰的浓度为0．0016’0．066Bg／g(新鲜血)，在红细胞中 含量为0．0115’0．066Pg／g”1。但对其跨人红细胞膜输运的动力学和机理研究很少。为此我们研 究了M112+离子及其在血桨中的重要物种锰一柠檬酸根配合物[Mn(tit)]跨人红细胞膜输运的动力 学和机理。) 1．实t及其结果 1．1材料和仪嚣． 人血红细胞(HRc)，北京市血液中心提供。二异硫氰酸根二苯代乙烯一2，2’一二磺酸 (4，4’一diisothiocyanatostilbene一2，2’一disulfonicacid，DIDS)，Sigma．乌本苷 (ouabain)，华美生物工程公司。MnCl2，A．R，北京化学试剂公司。其余试剂均为分析纯，所用 溶液均用重蒸水配制。 SpectrAA一40原子吸收分光光度计，Varian．LGlO-24A和LD4—2A型离心机。 1．2实验 1．2．1人红细臆OⅡic)对啪子摄入及DIDS和乌本苷影响的测定 血桨等渗液PIB的组成(mmol／L)：NaCI135，KCl5．0，MgCl21．0，Tris10．0，NaHC0310， 7．4。 葡萄糖10．0，pH 用离心法将新鲜HRC用PIB洗涤2次，按红细胞压积计加入等体积的PIB以制备HRC悬浮液。 X X 悬浮液，使MnCl2的终浓度为5．00i0’4mol／L，DIDS或乌本苷溶液的终浓度为8．6101mol／L。 于37℃分别温育0．00，0．25，0．50，1．00，1．50，2．00h，于4℃水浴终止反应lmin，迅 速在4000rpm下离心4min，用冷PIB离心洗涤细胞2次。加入2ml冷重蒸水，于4℃下溶血3h。 后将硝化物用重蒸水定容至5．OOml，用石墨炉原子吸收分光光度法测定锰浓度。HRC摄入‰2’ 的动力学如表1；阴离子通道抑制剂DIDS及K‘、Na+及Ca2+跨膜输运抑制剂(主要是抑制Na‘， K+_ATPase)鸟本苷(OUA)对HRC摄入Mn2+的影响见表2。 表1．HRC摄入妇2’的动力学 C=细胞内‰浓度；c 4国家自然科学基金资助项目 edu．cn ++pjclrc@bjmu 7 胡之差。 表2．DIDS及鸟本苷(OUA)对HRC摄入Mn”的影响(n=4) clh=温育lh后红细胞内Mn浓度； Cnet=clh—cO，净摄入浓度，即clh与温育时间为0．OOh时胞内^111浓度∞之差。 1．2．2人红细胞摄入[眦ti】。及DIllS影响的舅定 Na[MnCti]通过将MnCl2与柠檬酸钠按摩尔比1：l混合监在水浴上适当加热制备。 血桨等渗液PIB’的组成(mmol／L)：NaCI145，KCI5．0，Tris 7．4． i0．0，葡萄糖10．0，pH 2。与柠檬酸根络合，因此PIB’中不含MgCl2(与PIB不同)。 为