人食管癌自发性淋巴道转移实验动物模型的建立研究.pdfVIP

第六届中南地区实验动物科技交流备 论文汇编 人食管癌自发性淋巴道转移实验动物模型的建立 谢仰民“2，谢良喜’，李德锐3，李芳2，陈炯玉4，洪超群4 (1．湖南农业大学动科院；2．汕头大学医学院动物中心；3．汕头大学医学院附属肿瘤医院放疗科 4．汕头大学医学院附属肿瘤医院肿瘤研究中心) 指导老师 曾德年教授 【摘要】目的报道一个人食管癌免疫缺陷小鼠自发性转移模型及其转移性淋 巴来源细胞亚系的建立方法。方法一将食管癌细胞系Eca-109细胞悬液注射至SCID小 鼠胃壁。三个月后或动物频死时处死解剖，观察肿瘤在小鼠体内的生长转移情况，对 内眼可见的转移病灶先建立皮下移植模型后建立转移性细胞亚系。结果共建立9只 胃壁移植瘤动物模型，其中一只出现纵隔淋巴结转移和肺转移。取淋巴结转移灶部分 移植至动物皮下，在动物皮下传代两个月(共4代)后，进行常规组织块培养，建立新细 胞亚系，命名为LnMl／Eca一109。结论肿瘤胃壁移植是建立食管癌免疫缺陷动物自发 性转移模型和筛选转移性细胞亚系的可行方法。 【关键词】食管肿瘤；动物模型；肿瘤转移；细胞系；细胞亚系 由于多方面的原因，目前国内外尚未建立食管癌高转移细胞亚系和动物模型，国内至今仍未有 可产生自发性转移的动物模型，上述实验模型的缺乏，使食管癌转移方面的基础研究明显滞后其他 肿瘤，所以建立食管癌自发性转移模型十分必要。 ， 我们第一次尝试将食管癌肿瘤细胞移植至实验动物胃壁，以提高食管癌自发性转移率。通过上 述方法，我们成功获取了食管癌第一代转移性病灶，建立了第一代食管癌淋巴道转移性亚系，为下一 步的筛选食管癌高淋巴道转移细胞亚系和建立高淋巴道转移动物模型奠定了坚实的基础。现将有关 的技术方法进行报道。 ，一‘。， 1材料与方法 饲养【使用许可证号SYXK(粤)2004-0024] F12(1：1)，小牛血清为10％。实验时取对数生长期细胞，常规胰酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，生 基金项目：广东省科技厅计划项目(编墨，2004860301006，2005830301010；) 作者简介：谢仰民 研究方向实验动物疾病模型 562 论文汇编 第素届中南地区卖验动物科技交流套 理盐水洗1次，再离心，以生理盐水稀释至细胞密度为107／ml备用。 1‘3食管癌胃壁移植动物模型的建立氯胺酮肌肉注射麻醉动物，注射部位为大腿外侧，剂量为 50mg／Kg，常规备皮，酒精消毒皮肤，取腹正中切13切开皮肤和腹壁，拉出胃，以生理盐水棉花将胃与 其他内脏隔离，在显微外科头戴式放大镜协助下将0．02—0．04ml细胞悬液到胃小弯浆膜层。注射成功 时，肉眼观察到胃壁分层，隆起直径约为3-5ram的透明液性包块。注射完毕后以75％酒精棉球压住针 眼．抽出注射器，继续以酒精棉球压迫针眼5分钟，以杀灭漏出的癌细胞，随后以Ec生物胶封闭针眼。 最后将胃回纳至腹腔内，以4_o号线分别缝合腹壁和皮肤。 1．4实验动物观察术后，每日观察小鼠的营养、精神、活动状况。术后90天时或发现小鼠处于全身 衰竭状态时处死小鼠．进行详细的系统解剖，寻找转移灶。对肉眼观察到的肿瘤转移灶部分行病理观 察，部分接种于小鼠皮下传代扩增，为建立第一代转移性细胞亚系做准备。每只小鼠的主要内脏(心、 肝、肺、肾、脾、肠系膜、胃)均行病理检查。 1．5转移性细胞亚系的建立食管癌胃壁移植动物模型产生的白发性转移淋巴结在SCIDd．鼠皮下 将血清浓度降低至10％维持。 2结果 共建立9只Eta一109胃壁移植小鼠模型，每只小鼠均胃壁成瘤(图1)，其中一只小鼠出现纵隔 (隆突下)淋巴结肿大。取该淋巴结一半接种于新鼠皮下建立皮下移植瘤动物模型，另一半淋巴结 组织行病理检查，结果见淋巴结内有转移性肿瘤细胞，符合人鳞状细胞癌特征(图2)，另外病理检 查显示该小鼠肺内同时有肿瘤微转移灶存在(图3)。该小鼠的转移性淋巴结在皮下成瘤，并在动 物皮下传到第3代时，我们利用组织块培养的方法建立了第一代转移性肿瘤细胞亚系，命名为 h