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29(1)68-73 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2013 年 2 月 基于高分辨熔解分析的cry1I类基因的克隆、表达及活性分析 1,2 1,2 2 2 2 1 2* 赵 灿 ，张春鸽 ，束长龙 ，孙 冰 ，宋福平 ，高继国 ，张 杰 （1. 东北农业大学生命科学院，哈尔滨 150030 ；2. 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193 ） 摘要：本研究将高分辨熔解分析（high resolution melting assay ，HRMA ）的方法应用于cry1I 类基因的分 型。根据已报道的 cry1I 类基因的保守区设计一对扩增片段为 131 bp 的通用鉴定引物，利用高分辨熔点 仪对产物的熔解曲线进行分析。利用此方法对本实验室保存的标准菌株 HD-12 进行了 cry1I 类基因的鉴 定，克隆到 2 个新型的 cry1Ib 和 cry1Id 基因，被 Bt 国际命名委员会分别正式命名为 cry1Ib11 和 cry1Id2 。 这两种基因在E. coli Rosetta 菌株中能正常表达 81 kDa 的蛋白。Cry1Ib11 和 Cry1Id2 蛋白对小菜蛾Plutella xylostella 二龄幼虫和亚洲玉米螟 Ostrinia furnacalis 初孵幼虫具有显著的杀虫活性，LC50 分别为 6.13 μg·mL−1 和 6.10 μg·mL−1 及 11.18 μg·mL−1 和 1.43 μg·mL−1。但对甜菜夜蛾 Spodoptera exigua 及鞘翅目的大 猿叶甲 Colaphellus bowringi 均没有明显毒杀作用。高分辨溶解分析法为新型 cry 基因的快速、准确鉴定 提供了有效的工具。 关 键 词：苏云金芽胞杆菌；高分辨熔解分析；cry1I；克隆；杀虫活性 中图分类号：S476.11 ；Q786 文献标识码：A 文章编号：1005-9261 (2013)01-0068-06 Identification of Novel cry1I-type Genes from Bacillus thuringiensis HD-12 Strain on the Basis of High Resolution Melting Assay 1,2 1,2 2 2 2 1 2* ZHAO Can , ZHANG Chunge , SHU Changlong , SUN Bing , SONG Fuping , GAO Jiguo , ZHANG Jie (1. College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030; 2. State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests/Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China) Abstract: High resolution melting assay was used to identify cry1I genes in this study. A pair of universal oligonucleotide primers was designed to amplify conserved region fragmen