应用免培养法研究云南腾冲热海几个高温热泉的细菌多样性研究.pdfVIP

摘 要 应用免培养法(culture-independentapproach)研究地球上高温地热环 境中的微生物多样性具有重要的理论意义和实际意义。为了更加深入地了 解高温地热环境中的微生物多样性，同时进一步完善本实验室的免培养方 法，从云南腾冲热海6个具有代表性的高温热泉中采集到不同性质的7 份样品，应用显微形态观察法、DGGE分析法和rRNA法对其中的细菌多 样性进行了比较研究。结果初步表明，所研究样品中均具有比较丰富的细 菌多样性，柏互之间存在明显差异。而且不同方法检测到的细菌多样性并 不完全一致。 41先，通过显微形态观察和变性梯度凝胶电泳(DGGE)对腾冲热海6 个高温热泉的7份样品的细菌多样性进行了初步分析。显微形态观察的结 果显示，不同样点的微生物在形态上有很大差异。直接从环境样品中提取 总DNA，用两套细菌通用引物进行PCR扩增，分别得到包含V8和V9高 变区的16SrDNA片段，进行DGGE分析，结果显示:所有样品中都存 在有丰富的细菌多样性;菌席样品和泉底沉积物中细菌的组成差异很大; 一些关键的环境因子，如温度、氧气等会对群落中微生物的物种组成产生 很大影响。 其次，应用rRNA法研究了珍珠泉((ZZQ)样品的细菌多样性，并与 DGGE法进行了比较研究。直接从环境样品中提取总DNA，用细菌的16S rDNA通用引物，经PCR扩增出其中细菌的16SrDNA的近全序列片段， 连接、转化进入大肠杆菌。通过克隆筛选和扩增 rDNA限制酶切分析 (ARDRA)选择出6个代表克隆，测定它们的16SrDNA近全序列。系统发 育分析的结果表明，有5个序列分属于:Pseudomonas属和Vrgibacillus 属，其中ZZQclone133可能是Pseudomonas属中的一个新种，而 ZZQclone53和ZZQclone79很可能代表irrgibacillus属中的一个新种。另 一个克隆ZZQclone107属于Bacillaceae科，介于Bacillu，属和Virgibacillus 属之间的一个新的属一级的分类单元。 最后，由于在DGGE与rRNA法的比较研究中，两种方法检测到的 细菌多样性结果并不完全一致，说明每一种方法都有一定的选择性和局限 性，要想尽可能真实地反映环境中微生物的存在状况，必须利用多种分子 生物学的方法，并结合纯培养法进行综合分析。只有这样，才能更全面、 充分、客观地认识微生物在自然环境中的天然存在状况，为微生物资源的 开发和保护提供更多有用的信息。 关键词:高温热泉 DGGE rRNA法 细菌多样性 Abstract Therearegreatsignificanceinboththeoryandpracticeonstudyingthe microorganismsofhyperthermalhotspringswiththecultured-independent approaches.Inordertogetmoreknowledgeaboutthemicrobialdiversityof the hyperthermal hot springs and consummate a series of cultured-independentapproachesthatfitourlaboratory,microscpy,denaturing gradientgelelectrophoresis(DGGE)andrRNAapproachwereemployedto assessandtocomparethebacterialdiversityof7sampleswhichwere collectedrfom6differenthyperthermalhotspringsinTengchongRehaiof Y山man,China.Theresultsnotonlyindicatedthatthereisrichbacterial diversityinallsamplesbutalsoshowedthemicrobialcommunitydifferences betweenthe7samples.Furthermore,theresultsthatwereinspectedwith differentmolecularmethodandtechnologywerenotcompletelyconsist