应用农杆菌介导GUS基因优化多年生黑麦草转化体系的研讨.pdfVIP

中国草学会草坪专业委员会学术研讨会论文与摘要集 附录： 表一诱导愈伤培养基配置表 表二愈伤分化培养基配置表 盯呲o 僦特，2 o 3 ㈣吼晒。o 2 4 o 2 5 2 6 4 7 4 8 4 9 6 m 6 n o帖眈叭帖毗吡 6 姒舭叭眈吆吁。眦耋|叭哪耋|¨ 应用农杆菌介导GUS基因优化多年生黑麦 草转化体系的研究 张振霞，刘萍，杜雪玲，杨中艺 (中山大擘生命科学学院，广州510275) 籀要I本文通过检测愈伤组织 ous基因的瞬间表达，研究了农杆茵LBA4404／pCAMBIAl301 介导多年生黑麦草的转化体系．通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较，确立了其遗传转化的最 佳优化条件．研究发现，在多年生黑麦草不同品种的转化率在25-45％之间变化．多年生黑麦草 遗传转化最佳优化条件是预培养IOd的胚性愈伤组织，浓度为0．5-0．80D的农杆菌茵液以及2d共培 养时间．在共培养基中添加lo陬mol／L乙酰丁香酮能有效地提高植物瞬间表达率．两种侵染处理 方法比较结果为滤纸滴加法比浸泡法更优．转化后对愈伤的干燥处理能抑制农杆菌过度繁殖．能 改善愈伤状态。有利于提高转{匕率。 关键词：多年生黑麦草，农杆菌转化，GUS基因 引言． 。多年生黑麦草作为草坪草种，在国外已经有许多通过常规育种方法育成的品种，在生 态环境改善、水土保持、城市绿化、运动场建设等方面发挥了重要的作用。但是．由于我国 草坪草育种工作起步很晚，至今尚无真正的草坪草育成品种，因此，与发达国家相比，我国 项目来源：国家转基因植物研究与产业化专项(J2002-B--006) 作者简介l张振霞(1975．)，女。博士后。专业方向：基因工程．E-mail：—zzx841l回—163．com 通讯作者：扬中艺·教授。博士导师，E-mail：j《§疆￥@爸9鲤i皿 草种资源与园林植物 的草坪草育种工作极其落后，有必要通过非常规手段加快新品种的培育工作．其中，通过转 基因技术导入优良性状是培育新品种的较快速的途径，尤其是对于多年生的草坪草种而言， 这一育种方法有着传统育种方法不可比拟的优势【11。在草坪革的转基因技术方面，国内外已 经开展了一些研究，也取得了一些成果，但在所查的文献中尚未见应用该技术手段育成的品 种。其中，在多年生黑麦革的转基因技术研究方面已有人开展了一些工作，大多数采用基因 枪转化方法【2】，在农杆菌遗传转化方面的研究很少Pl。为此，有必要在多年生黑麦草农杆菌 遗传转化体系方面开展更多的研究，为建立稳定而有效的多年生黑麦草转基因育种技术体系 奠定基础；同时本研究还使用了多个品种开展试验，以探讨农杆菌介导GUS基因对多年生黑 麦草转化的方法及基因型对转化效率的影响；这正是本研究的主要目的。 l材料和方法’ 1．1材料 t1．1植物材料 供试的多年生黑麦草(Loliumperenne 及和平(vat