应用小鼠胚胎成纤维细胞培养检测镉、甲醛的细胞毒性研究.pdfVIP

应用小鼠胚胎成纤维细胞培养检测镐、甲醛的细胞毒性 研究生 张 敏 导 师 纳冬荃 教授 刘 苹 教授 【摘要】 目的 在本实验室建立小鼠胚胎成纤维细胞培养方法，并在此基础上用培养的细胞检 测氛化锅、甲醛等外来化合物的细胞毒性反应。 方法 在无菌条件下从怀孕小鼠取得胎龄12-16日的胎鼠，用0.25胰蛋白酶消化 法和组织块培养法进行小鼠胚胎成纤维细胞培养，对原代培养细胞进行传代培养和成纤维 细胞的纯化，并应用培养的成纤维细胞检测不同浓度的氯化锅、甲醛对细胞存活情况 (MTT比色法)和遗传毒性 (微核实验)的影响。 结果 成功进行了小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和传代培养，确定了适当的培养传 代方法;绘制了细胞生长曲线:用第三代细胞测定氯化锡、甲醛的24小时半数抑制浓度 (ICs.)分别为20.51umol/L和4.54ag/L，剂量对数与概率单位之间的直线回归方程分 别为Y=7.823-2.209X和Y=7.563-0.978X，直线相关系数:分别为一0.972、-0.994. 氯化锅、甲醛24小时染毒的微核实验结果显示，氯化锅和甲醛均能在不使细胞存活率下 降时即可导致微核细胞率增高。 结论 。.25胰蛋白酶消化法和组织块培养法均可用于小鼠胚胎成纤维细胞培养，前 者效果较好:应用0.125 胰蛋白酶消化传代细胞比用0.05 胰蛋白酶10.02%EDTA混合 液更方便和易于掌握，细胞在传至第三代时基本纯化，生长状况较好:小鼠胚胎成纤维细 胞体外暴露于氯化锡、甲醛造成存活率下降和遗传损伤:实验具有一定的稳定性和可重复 性，用于外来化合物体外毒性检测具有一定的应用价值。 关键词 小鼠 成纤维细胞 体外培养 细胞毒性 TestCytotoxicityofCadmiumandFormaldehydebyUsing MouseEmbryoFibroblastsCultureinvitro Postgraduate:ZhangMin Tutor:Prof.NaDongquan ProfLiuPing [Abstract] Objectives:Tosetupthemethodsofmouseembryofibroblastscultureinvitroandto evaluatethetoxicityofxenobioticssuchaschloridecadmiumandformaldehydebyusingthese methods. Methods:First,embryosaregottenbyasepticsurgeryfromthemousewhichhadbeen pregnantfor12-16days,thentheembryofibroblastsareculturedbyusingtwomethods.One methodistocultureafterdigestingthetissuesvia0.25%trypsin;theotherisusinglittletissues directly.Afterconductingprimaryculture,wesubculturethefibroblastsandgetthepurified fibroblasts.Atlast,wedetectthecytotoxicity(MTTcolorimetricassay)andgenotoxicity (micronucleustestinvitro)ofchloridecadmiumandformaldehydebymeansofthefibroblasts culture Results:Theexperimentonprimarycultureandsubcultureinthemouseembryo fibroblastswasconductedsuccessfully.Themethodsforculturingthemouseembryos fibroblastswer