健康人与鼻咽癌患者鼻咽部菌群结构及多样性分析.docVIP

精品论文 参考文献 健康人与鼻咽癌患者鼻咽部菌群结构及多样性分析 广西医科大学第一临床附属医院放疗科 广西南宁 530021 【摘 要】目的：比较健康人与鼻咽癌患者鼻咽部菌群结构的组成分布及多样化表现，探讨细菌结构变化与鼻咽癌的关联。方法：使用T-RFLP分析技术分析对比健康者及鼻咽癌患者鼻咽部群菌结构的差异。结果：9例健康者共获取82种T-RFs片段，并以 T-RF119、T-RF152、T-RF 235、T-RF 400的优势菌群为代表；而7例鼻咽癌患者共获得91种T-RFs片段，优势菌群分别为T-RF 62、T-RF 77、T-RF 146、T-RF 333、T-RF 400；多样性指数方面，鼻咽癌患者的香农指数、辛普森指数、均匀度指数均低于健康人，但T-RFs数目明显增高（Plt;0.05）。结论：健康人与鼻咽癌患者在鼻咽部的菌群构成和丰度存在明显差异；T-RF 62、T-RF 77、T-RF 146、T-RF 333所代表的优势菌群可能与鼻咽癌相关；与健康人相比，鼻咽癌患者的菌属种类明显增多，但优势菌群减少，菌群结构的多样化程度下降，物种分布均匀度较差。 【关键词】鼻咽癌；菌群；T-RFLP技术；多样性指数 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）全球每年总体发病率小于1/10万，但在我国华南地区特别是广西、广东两省其发病率却大于20/10万[1-2]。EB病毒感染、遗传因素、环境影响等常见因素在鼻咽癌病因学中起重要作用[3-4]。但随着分子生物学的发展，不断有学者发现人体细菌群落结构的改变与肿瘤的发生发展可能存在某种关联。例如Burkit的淋巴瘤研究结果发现，EBV可能并非唯一的感染性致癌因素，而是与其他微生物如疟原虫的协同感染而促使细胞癌变[5-6]。中南大学的研究组曾在鼻咽癌患者的鼻咽部发现纳米细菌，并认为可能与鼻咽癌发病有关[7]。这些线索提示我们，了解鼻咽癌与健康人鼻咽部微生物的群落组成结构的差异，对鼻咽部肿瘤的病因学研究及防治有着极为重要的意义。 本研究通过分别对10例健康者及鼻咽癌患者的鼻咽部进行样本采集，利用末端限制性酶切片段长度多态性分析技术（Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism，T-RFLP），比较两者间细菌菌群的组成结构及分布，根据香农指数、辛普森指数、均匀度的多样性指数描述其多???化程度差异，探究鼻咽部菌群结构的改变与鼻咽癌的可能关联，并为鼻咽癌的病因病机供基础数据和科学依据。 1 材料与方法 1.1 标本 选择2013年9月至2014年4月在广西医科大学第一临床附属医院放疗科的7例鼻咽癌患者为研究对象，年龄18-70岁，KPS评分gt;90，并在近1个月内无抗生素、激素及免疫抑制剂使用史；采取调强适形放疗技术进行治疗，治疗周期约6-7周。对照组为9例健康志愿者。对所有研究对象采集鼻咽拭子样本共20份，使用400mu;L PBS缓冲液储存拭子样本并置于-20℃超低温冰箱备用。 1.2 鼻咽拭子DNA提取 使用玻璃珠机械破碎法+溶菌酶裂解法结合DNA提取试剂盒法（Beads--Lysozyme+QIA法）进行DNA的提取[8]。 1.3 T-RFLP技术 利用通用引物对16SrRNA基因可变区进行扩增。正向引物 8F：5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，荧光标记FAMtrade;；反向引物 1492R：5-GYTACCTTGTTACGACTT-3，荧光标记CY3。使用普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行目的片段纯化回收。纯化后的PCR产物经过Hha I和Msp I双酶切消化后在ABI3100遗传分析仪上进行测序，得到的T-RFLP图谱用GeneScan version3.7软件进行分析。 1.4数据分析方法 实验数据利用SPSS19.0统计软件分析处理，健康人和鼻咽癌患者的T-RFs丰度的比较采用两样本均数t检验，当P值lt;0.05差异具有统计学意义。通过BI0-DAP程序计算菌群结构的多样性参数：香农指数（Shannon index H）、辛普森多样性指数（Simpson index D）、均匀度指数（Eveness index E）。 2 结果 2.1 健康者与鼻咽癌患者的鼻咽部细菌群落在构成和丰度上均有显著差异 研究结果显示，9例健康志愿者共获取82种不同T-RFs片段，其中有27种TR-F片段的相对丰度gt;1 %，可视为优势片段，而相对丰度在前5名的优势菌属在各个健康志愿者中均能检测出，它们分别为：T-RF 119（9.5%）、T-R