水压转染法在小鼠不同肝叶的表达效率-中国细胞生物学学报.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(10): 1123– 1126 http ://www.cj 技术与方法 水压转染法在小鼠不同肝叶的表达效率 , , , 12 12 2 12* 方　方 　常玉巧 　李娜娜　刘恒兴 1 2 ( 新乡医学院人体解剖学教研室, 新乡453003; 河南省组织再生重点开放实验室, 新乡453003) 摘要 为了解水压转染法(hydrodynamics-based transfection, HDT)在小鼠肝脏不同肝叶的转 10% pEGFP-C1 35 μg/ 染效率, 将容量为小鼠体重的 , 绿色荧光蛋白基因质粒 含量为 只的生理盐水溶 液以0.4 mL/s的速度从小鼠尾静脉注射, 于注射后不同时间取小鼠各肝叶制备冰冻切片, 在荧光显 12 h 微镜下观察, 计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况。结果显示注射后 , 绿色荧光蛋白阳性细胞 24 h 48 h 比例最高, 从 起表达量逐渐减少, 至 时各肝叶均基本难以检测出绿色荧光蛋白阳性细胞。 12 h 22% 在 观察各肝叶的转染效率如下: 右叶、蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为 , 左叶、中叶、 15% 尾状叶约为 , 取材部位不同会造成数据分析的极显著差异。 关键词 小鼠; 肝脏; 水压转染法; 增强型绿色荧光蛋白 质粒介导的外源基因体内表达是研究基因功 显微镜为日本Nikon公司生产的ECLIPSE 80i。 能和进行基因治疗的基本方法, 具有制备简便、价 1.1.2 质粒和主要试剂 质粒pEGFP-C1 由新乡 廉、安全等优点, 是介导外源基因转移和表达的理 医学院生物化学与分子生物学教研室张继红赠送。 想载体。小鼠尾静脉快速注射大量质粒介导外源基 质粒大量提取试剂盒D1110购自北京索莱宝科技有 , 因肝脏表达的效率比常规方法如门静脉注射法提 限公司 生理盐水常规制备。 高了100~1 000倍[1-3], 由于该方法介导的基因转染率 1.2 方法 和表达水平主要取决于质粒溶液在体内形成的瞬时 1.2.1 水压法转染小鼠肝脏细胞 乙醚麻醉小 液压, 因此被称为水压转染法(hydrodynamics-based 鼠, 用脱脂棉球蘸取60~70 ºC 的热水擦拭鼠尾, 使 transfection, HDT) 。这种方法建立在常规尾静脉注 鼠尾表面的角质层软化和尾静脉充血, 将无菌注射 射的基础上, 因此操作简单易于掌握, 对实验室硬件 器针头刺入距鼠尾1/3处的静脉内, 以注射容量为 要求不高, 易于推广和使用, 目前被广泛应用于肝脏 小鼠体重10% 、质粒含量为35 μg/只、注射速度为 病理模型的构建、基