色谱峰,色谱柱及参数.docVIP

死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。 死体积(dead volume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速）  梯度方法的建立： Rs：分离度，表示两峰分离程度的物理量。 k：容量因子，表示某溶质在固定相和流动相中物质的量的比，在等度洗脱中。一种物质的k值是恒定不变的。上面两试针对的是梯度洗脱，表示的平均容量因子。 a：分离因子，两个溶质的容量因子的比。通常k大的作为分子。表示两物质分离能力的大小。 N：理论塔板数，表示柱子的分离能力，也就是柱效。 ：梯度时间；F：流速；：死体积；：梯度变化范围。 常见问题和维护： 整个液相系统最值得关注的常数：压力 除体系受到污染之外，几乎所有柱前的问题都能在压力变化上表现出来。 压力来源：泵上的压力传感器 最常见的问题： 压力小（几乎为零）：说明没有流动相流过柱子。 可能原因： 柱前漏夜 流速设为0了 流动相干了 吸滤头没有放流动相液面之下 流路中有大段气泡 处理方法： 漏液：从泵的出口到柱子的前端接口（柱后漏液几乎不会影响压力值）顺次检查。泵上有自己的漏液传感器。检测到漏液。会停止工作并蜂鸣，变红。同时显示错误信息：ERROR：LEAK DETECTED。发现漏液点，先停泵，重新接好。将漏液擦干。 有的漏液不明显，这时压力的也不会太小，检查时要注意，可用手仔细摸各个接口，感觉是否湿冷。 流路中有大段气泡： 通过大流速（如5ml/min）冲洗可以去除泵体内气泡。也就是常说的PURGE。按下泵的面板上的purge键即可。每次PURGE的时间和流速可以在面板上设定。通常不改。初始值应该是5ml/min，3min。 但有时候泵体内空气太多，purge都不可以，或者很难抽上流动相，这是可以在purge的同时，用注射器，在泵的废液出口处抽。直到没有气泡。 关于偶尔出现的气泡，不用太过在意，因为： 有脱气机在。 在purge时，由于流速太大，难免会出现气泡。尤其是在purge阀开超过180度，废液出口处出现气泡就跟平常了。 只要气泡不在泵腔内堆积，就几乎不会影响到分析结果。只要出了泵口，在高压下会 被压缩的很小。不影响流路的延续性。 所以，只要观察压力变化，如果压力没有异常波动，就行。在泵体内有气泡堆积时，压力波动会变大。什么样的波动算正常，需要大家注意观察。根究经验，在以恒定流速，梯度不变时，面板上以MP为单位的显示值应该几乎不变。 频繁出现的气泡会影响到流路的延续性，应该注意。吸滤头堵，管路脏（通常是水相）有可能带来频繁出现的气泡。可以先A，B的溶剂瓶调换一下。PURGE三五次。后换回来，再PURGE两次。清洗一下管路。 压力过大：说明流路堵了 逐段排查，先从柱（预柱）前接口（因为柱子最易堵）断开，以一定流速走： 压力正常，说明是柱子及其后的某一段堵了（通常是柱子）。换柱子（或预柱）。 压力还高：说明是柱前某段堵了。 这时再将进样器出口（接柱子）的peek管接头拧下： 压力正常：说明是这段peek管堵了。换peek管。 压力还高：说明是进样器之前的部分堵了。通常是进样器六通阀堵了。反冲或清洗流通阀。 其它部分依次类推。 压力波动大：说明流路中的液流不平稳，这时色谱图通常保留时间不稳定，峰型也不好。得到的线性，重复性也不会好。 可能原因：泵体内有气泡，泵头单向阀坏。 先确认是哪一台泵有问题。先走100%A相。看是否压力还是波动大，还大则说明A泵有问题。压力正常则说明A泵正常。再走100%的B相，过程如上。 确认好泵之后，先purge一下，以驱赶气泡。Purge两次后，还是压力波动大，这有可能单向阀坏了，需要清洗或更换。 Ctc自动进样器的常用维护操作（实验室现场操作）： 换针： 调针位： 调针位： 设定洗针体积： 一些小概念： PEEK：聚醚醚酮 色谱管道，外径多为1/16inch，1inch=2.54cm，1/16in=2.54cm，内径大小以颜色标准，红色（我们用的）最小，为0.13mm（应该是国际统一标准） PEEK接头手紧即可 不锈钢接头要用工具紧 接头分一体的和分为主体和压紧环两部分的。后者在拧紧的过程中，不易带动管道扭曲变形。 不锈钢的压紧环是一次性的 单位换算： 1MPa=10bar=7500.6torr=14.5psi Psi：pound per square inch (psi) Torr：托里彻利，标准大气压的1/7