草鱼肝胰脏中两种胰蛋白酶的纯化及部分性质的-重庆师范大学学报.PDF

! ##$ 年% 月 重庆师范大学学报（自然科学版） ’() ##$ 第* 卷 第% 期 +,-(’. +/ 01+(234(2 5+-6’. 7(489-:4;（5’;,-’. =49(9 ?@4;4+( ） A+.) * 5+) % 动物科学 草鱼肝胰脏中两种胰蛋白酶的 纯化及部分性质的研究! % % 耿莉娜 ，胡重江 ，李英文 （%) 重庆市高校动物生物学重点实验室，重庆市高校生物活性物质工程研究中心，重庆师范大学 生命科学学院， 重庆B###BC ； ) 西南大学 生命科学学院，重庆B##C %D ） 摘! 要：本试验采用硫酸铵分级沉淀和鸡卵类粘蛋白偶联的琼脂糖凝胶亲和层析的方法，从草鱼（!#$% ’()*$+%,%$ -,#../0 ）肝胰脏中提取胰蛋白酶进行纯化，得到两种酶，即胰蛋白酶E（FGE ）和胰蛋白酶H（FGH ），并对其性质进行了 分析。结果表明，两种酶的=I=JKEF? 电泳均呈现出单一条带，表明已得到高度纯化，两种酶分子量约为C L@’ 。以 HE5KE 为底物，测得草鱼胰蛋白酶E（FGE ）的动力学常数（L6 ）为# ) MC 6N 。以GEN? 为底物测得两种胰蛋白酶最 适反应温度为D# O ，最适反应PQ 值为$) # ，当温度超过D# O ，它们不稳定，这两种胰蛋白酶在PQ 值R ) # S %%) # 时 较稳定。 关键词：草鱼；胰蛋白酶；亲和层析；性质研究 中图分类号： T**D 文献标识码：E! ! ! 文章编号：%DCJ DDRM（##$ ）#%J ##%BJ #D ! ! 胰蛋白酶属丝氨酸蛋白酶家族，具有肽链内切 了具体的研究［* ］；叶元土等对长江特有的两种肉食 酶活性，对由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基 性鱼类南方大口鲶和长吻鮠的胃、肝胰脏、肠道中蛋 与其它氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一 白酶、淀粉酶的最适温度和最适 PQ 值进行了测 性，在对鱼类食物蛋白质的消化中起重要的生理作 ［D ］ 定 。上述对鱼类胰蛋白酶的研究结果主要还是基 用。它由胰腺分泌，广泛存在于鱼类的肝胰脏、肠道 于粗酶活性测定的方法，还不能真正反映胰蛋白酶 以及幽门盲囊中。许多研究报道，胰蛋白酶是以无 的活性变化。本文在分离纯化草鱼胰蛋白酶的基础 活性的酶原形式存在于鱼类胰脏中，被肠激酶或有 上，进一步对得到的两种草鱼胰蛋白酶成分的酶学 活性的胰蛋白酶自身激活，从肽链5 端赖氨酸和异 性质进行了初步研究，有助于深入分析鱼类胰蛋白 亮氨酸残基之间的肽键断开，失去一段六肽，分子构 酶在蛋白质消化中的作用。 象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。 % 材料与方法 目前已经从多种哺乳动物如鼠、狗、牛、猪等中 分离出胰蛋白酶以及胰蛋白酶类丝氨酸蛋白酶。对 %) % 亲和介质的合成 鱼类消化酶的研究也有报道， A+(U 在 %RC 年就研 % ）鸡卵类粘蛋白的分离及纯化。本试验使用 究了鲤鱼（ ［%］ !* )1$/0 2() 1% ）肝胰脏的蛋白酶活性 ； 自提的鸡卵类粘蛋白，蛋清加入三氯乙酸沉淀杂蛋 在国内，黄耀桐于最早对草鱼肠道肝胰脏蛋白酶活 白，再加入丙酮沉淀得到粗的卵类粘蛋白。用=9P1J 性进行了初步研究，并分析了消化酶与饲料的关 ’@9V FJ* 凝胶层析脱盐，再用 I? JM 离子交换层 ［ ］ 析柱纯化，测定蛋白含量及卵类粘蛋白的比活性及 系 ；