生物选修1 53 血红蛋白的提取和分离.ppt

（4）凝胶电泳原理示意图 13、红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题： （1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步： _________、 _______ 、 _____和__________ 。 （2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________________________ 。 ②以上所述的过程即是样品处理，它包括_____________ 、 _____________ 、收集血红蛋白溶液。 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （二）血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 阅读P68—69教材内容，了解加样和洗脱的步骤 a．加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的_______缓慢下降到与___________平齐，关闭出口。 缓冲液 凝胶面 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （二）血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑴加样 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （二）血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 b．加样时，用____小心地将1mL透析后的样品加到______的顶端，注意不要破坏_____ 。 吸管 色谱柱 凝胶面 ⑴加样 c．加样后，打开下端出口，使样品渗入________内。 凝胶层 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （二）血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑴加样 注意正确的加样操作： ①不要触及破坏凝胶面 ②贴壁加样 ③使吸管管口沿管壁环绕移动 加入______________，打开下端出口，进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液。 磷酸缓冲液 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （二）血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑵样品的洗脱： △色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。 在鉴定的方法中，使用最多的是______________。 纯化 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 （三）纯度鉴定： 判断_____的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（动画演示） 1．红细胞的洗涤：洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果。 2．色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在洗脱液中膨胀，可以将加入其中的湿凝胶用沸水浴加热，加速膨胀。 3．凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 4．蛋白质的分离：如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 血红蛋白的提取和分离 蛋白质分子的差异性 凝胶色谱法 原 理 分离过程 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 成 作 用 蛋白质的 提取分离 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A