网站大量收购独家精品文档,联系QQ:2885784924

生物选修1 53 血红蛋白的提取和分离.ppt

  1. 1、本文档共56页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
生物选修1 53 血红蛋白的提取和分离

(4)凝胶电泳原理示意图 13、红细胞含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题: (1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步: _________、 _______ 、 _____和__________ 。 (2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________________________ 。 ②以上所述的过程即是样品处理,它包括_____________ 、 _____________ 、收集血红蛋白溶液。 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (二)血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 阅读P68—69教材内容,了解加样和洗脱的步骤 a.加样前,打开流出口,使柱内凝胶面上的_______缓慢下降到与___________平齐,关闭出口。 缓冲液 凝胶面 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (二)血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑴加样 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (二)血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 b.加样时,用____小心地将1mL透析后的样品加到______的顶端,注意不要破坏_____ 。 吸管 色谱柱 凝胶面 ⑴加样 c.加样后,打开下端出口,使样品渗入________内。 凝胶层 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (二)血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑴加样 注意正确的加样操作: ①不要触及破坏凝胶面 ②贴壁加样 ③使吸管管口沿管壁环绕移动 加入______________,打开下端出口,进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,用试管收集流出液。 磷酸缓冲液 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (二)血红蛋白的纯化——凝胶色谱操作 3、样品的加入和洗脱 ⑵样品的洗脱: △色谱柱成功标志:红色区带均匀一致地移动。 在鉴定的方法中,使用最多的是______________。 纯化 二、从红细胞中提取和分离血红蛋白的流程 (三)纯度鉴定: 判断_____的蛋白质是否达到要求,需要进行蛋白质纯度的鉴定。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(动画演示) 1.红细胞的洗涤:洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少,无法除去血浆蛋白;离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀,达不到分离效果。 2.色谱柱填料的处理:商品凝胶使用前需直接放在洗脱液中膨胀,可以将加入其中的湿凝胶用沸水浴加热,加速膨胀。 3.凝胶色谱柱的装填:在装填凝胶柱时,不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。 4.蛋白质的分离:如果红色区带均匀一致地移动,说明色谱柱制作成功。 观察你处理的血液样品离心后是否分层(见教科书图5-18),如果分层不明显,可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外,离心速度过高和时间过长,会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,也得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度。 1、你是否完成了对血液样品的处理?你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗? 由于凝胶是一种半透明的介质,因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯,检查凝胶是否装填得均匀。此外,还可以加入大分子的有色物质,例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖,观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整,说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡,轻轻敲打柱体以消除气泡,消除不了时要重新装柱。 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生?你的色谱柱装填得成功吗?你是如何判断的? 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话,能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整,随着洗脱液缓慢流出;如果红色区带歪曲、散乱、变宽,说明分离的效果不好,这与凝胶色谱柱的装填有关。 3、你能观察到蛋白质的分离过程中,红色区带的移动吗?请描述红色区带的移动情况,并据此判断分离效果? 血红蛋白的提取和分离 蛋白质分子的差异性 凝胶色谱法 原 理 分离过程 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 成 作 用 蛋白质的 提取分离 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定 1、随着人类跨入蛋白质组时代,对蛋白质的研究和应用越来越深入,首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中,关于蛋白质的叙述,正确的是 A

文档评论(0)

pangzilva + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档