日本沼虾mu型可溶性谷胱甘肽S-转移酶的克隆与表达研究.pdfVIP

第 32卷 第2期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．32 No．2 2013年 3月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Mar．2013。1O3～ 108 日本沼虾 mu型可溶性谷胱甘肽 S一转移酶的克隆与表达 瞿春梅 梁旭方 张 进 何 珊 沈 丹 华中农业大学水产学院，武汉 430070 摘要 利用简并引物从 日本沼虾肝脏克隆mH型 sGST基因cDNA核心片段获得其 sGST氨基酸序列。序 列分析表明日本沼虾肝脏mu型sGST基因cDNA核心序列长299bp，编码 99个氨基酸。日本沼虾 sGST与南 美白对虾 (Litopenaeusvannamei)、小鼠(Musmusculus)、大 鼠(Rattusnorvegicus)、肩突硬蜱 (Ixodesscapu— laris)、扇头蜱 (Rhipicephalusappendiculatus)、热带爪蟾(Xenopustropicalis)、微小牛蜱(Rhipicephalusmicro— plus)和太平洋牡蛎 (Crassostreagigas)的mu型 sGST基因核苷酸同源性为60％左右，表明所克隆的 日本沼虾 sGST亦属于mu型sGST。通过对 日本沼虾活体浸泡MC_LR，发现微囊藻毒素对 日本沼虾肝脏mu型sGST基 因表达没有显著的诱导作用。 关键词 日本沼虾；谷胱甘肽 转移酶基因；克隆；微囊藻毒素；活体诱导表达 中图分类号 Q959．223．63 文献标识码 A 文章编号 1000—242l(2013)02—0103—06 谷胱甘 肽 S-转移酶 (solubleglutathioneS- 在其体 内富集和存留，通过生态系统食物链对人类 transferase，sGsT)，也称微囊藻毒素去毒酶，是代 造成的潜在威胁不可忽视。但关于淡水螺、虾对微 谢多种 内源或外源毒性物质之解毒酶系统的重要组 囊藻毒素去毒作用机制的报道却很少。本研究通过 成部分，在微囊藻毒素去毒过程中起着关键作用，该 RT-PCR技术从虾肝脏成功克隆mu型 sGST基因 酶有胞液和膜结合两种形式，以胞液 GST (sGST) cDNA核心片段，并推测得到氨基酸序列，旨在为进 为主。sGST基因控制所有毒物在第 1时相之氧 一 步获得这些基因的侧翼调控序列，深入研究淡水 化、水解去毒过程后第 2时相所共有的加合去毒过 螺虾微囊藻毒素去毒基因的表达调控机制，阐述生 程，因此也被称为第 2时相去毒酶。它能催化微囊 态系统中微囊藻毒素去毒代谢分子机制奠定基础， 藻毒素与还原型谷胱甘肽 (glutathione，GSH)发生 并对从基因水平上定向筛选微囊藻毒素高效去毒鱼 加合反应，降低微囊藻毒素毒性并将其直接经排泄 虾品系，以及进一步研发转基因淡水鱼虾微囊藻毒 系统排出体外r1]。微囊藻毒素是由铜绿微囊藻、水 素生物去毒器提供理论依据。 华鱼腥藻等产生的单环七肽肝毒素，可造成野生动 1 材料与方法 物、家畜、家禽等中毒死亡E]，并引发人类肝损伤和 肝癌高发等危害_5]，微囊藻毒素对人类健康所造成 1．1 供试虾及试剂 的威胁 已引起世界各国公共卫生系统的广泛关 1)供试虾。试验虾于广东省湛江水库捕得，选 注[7书]，淡水藻类污染已成为一个全球性的环境卫生 活泼、健康、肢体完整、体长 4～5cm 的个体用于试 问题_l9]。哺乳类 sGST基因已有大量研究。近年 验 。试验前在实验室 1OL水族箱 中暂养 。温度为 来，对海水鱼类 (肉食性鱼类)sGST基因也有一些 (25±3)℃，养殖用水为曝气除氯的自来水，饲养期 报道ElO-12]，而 目前有关淡水鱼类 sGST基因研究 日 间连续充氧 。 益成为该领域的研究焦点l1引。蚌、贝类以及螯虾等 2)试剂 。总 RNA提取试剂盒 SVTotalRNA 有壳类无脊椎动物生活在富含毒素的水体中，毒素 IsolationSystem为Promega公司产品，RN