嗜水气单胞菌的离培养及鉴定嗜水气单胞菌的分离培养及鉴定.pdf

V01．33 第33卷／第2期／ 河北师范大学学报／自然科学版／ No．2 2009年3月 JOURNALOFHEBEINORMALUNIVERSITY／NaruralScienceEdition／ Mar．2009 嗜水气单胞菌的分离培养及鉴定 李 楠’．-， 孙讳敏1一， 田莉瑛1， 李晓明2， 申红旗3， 王风敏3， 李全振3， 曹杰英3， 赵宝华2 (1．河北化工医药职业技术学院制药工程系，河北石家庄050026； 2．河北师范大学生命科学学院．河北石家庄050016；3．河北省水产局病当监测站，河北石家庄050011) 擒 要：从患腹水病褐牙鲆体内分离致病菌，通过生理生化鉴定方法对该菌进行了鉴定．根据Genbank上报道 的嗜水气单胞菌标准株的16srDNA序列以及致病性嗜水气单胞菌所含有的气溶素(uer)基因没计了2对引物．对 所分离到的2株疑似菌以及3株标准株进行PCR扩增，均能够扩增出目的条带，经测序后，该菌的16srDNA的序 列，aer序列与标准株同源性分别达到99．8％和95％．与常规细菌鉴定方法所得结果一致，证明该菌为嗜水气单 胞菌． 关键词：嗜水气单胞菌；分离；鉴定；腹水；16srDNA 中围分类号：S941．42 文献标识码：A 文章编号：1000．5854(2009)02．0240．04 和非致病性菌株之分．致病性菌株对水产动物、家畜和人均有致病作用，在动物疾病学和食品卫生学研究上 都具有重要意义…．近年来嗜水气单胞菌引起我国水产动物细菌性败血症的流行，危害严重，造成了巨大的 经济损失，已成为我国水产养殖中所关注的问题【2“J． olivaceus)是珍贵的经济鱼类之一。尤其在我省渤海海域，是大规模工厂化养殖的优 牙鲆(Paralichthys 势经济特色品种．但是随着高密度工厂化养殖技术的迅速发展和海水污染的日益严重，腹水症、败血症和寄 生虫病等大规模暴发流行，引起牙鲆的大批死亡．嗜水气单胞菌既是恒温动物与变温动物的条件致病菌，又 是原发致病菌【71．但是，Austin等【8】报道嗜水气单胞菌通常在自然界是条件致病菌，充当继发病原而不是原 发病原．因此，环境的污染和养殖密度的提高，极易引起嗜水气单胞菌病的大规模暴发．据余德光等【9]报道， 5～10月肠型嗜水气单胞菌引起海水鱼类肠炎病流行，常见于卵型鲳鱼参、军曹鱼、大黄鱼、红鳍笛鲷等海水 鱼类．病鱼肠道充血出血，严重时引起全身坏血症而死亡．本文中，笔者建立了一种嗜水气单胞菌的分子生物 学检测方法，不仅克服了传统菌种鉴定中耗时长、手段繁琐、延误病情治疗的缺点，并具有更加快速、敏感、准 确的特点，适宜在实际生产中进行大范围推广． 1材料 实验用鱼由唐山会达水产养殖公司、唐山普林海珍、唐山十里海紫天养殖场提供． 实验菌株分离自患病褐牙鲆8株，疑似嗜水气单胞菌；嗜水气单胞菌标准菌株由南开大学惠赠． 2实验方法 2．1 形态学及生理生化鉴定 2．1．1发病症状及触片检查 唐山普林海珍、唐山会达水产养殖公司部分牙鲆鱼出现腹部膨胀，严重者有充血的肠脱落于肛门之外， 伴有肌肉以及背鳍尾鳍等处大面积出血，吻发红，腹部发红；患病鱼食欲不振．精神萎靡．每日均有大批死亡． 取病死牙鲆及濒死牙鲆腹水涂片及肠积水触片，经瑞氏染色后镜检观察． 收稿日期：2008—08—16；修回日期：2008一ll一20 基盒项目：河北省重点科技攻关项目 作者简介：李 椭(1981一)．女．河北肃宁人．硬士．主要从事徽乍物学研究． 通讯作者：赵宝华(1967一)，男．教授．研究方向为微乍物学．E．nuail：zhaohaohua86178@sohu．oom 万方数据 · ·