药学中的生物技术和方法ADMET方法.ppt

III -药物发现中的ADMET方法 什么是ADMET Absorption — 吸收 Distribution — 分布 Metabolism — 代谢 Excretion — 排出 Toxicity —毒性 ADME是药物动力学(Pharmacokinetics, PK)的内容 成功药物是个平衡体 药物必备性质 ---药物开发的前提条件 物理化学性质 溶解性 化学稳定性 生物学性质 生物屏障渗透能力 药物代谢性质（生物稳定性） 药物排出性质 蛋白质和器官组织的结合力 药物研发的并行策略 现代ADMET研究方法的特点 基于细胞或生物大分子的分析方法 人源材料的应用 小样品、高内涵和高通量分析能力 能够阐明药物性质的分子机理、建立结构-药物性质定量构效关系 合理药物运输/制剂系统 以往的研究表明：药物运输系统只能辅助而不能根本性的改变药物的口服吸收能力 合理的药物运输/制剂系统(rational drug delivery)必须依据药物本身的穿越消化肠道屏障的渗透能力 BCS系统 药物吸收 吸收屏障结构 药物消化道吸收的基本机制 体外单层肠上皮细胞药物吸收模型 已被认证的用于药物吸收的细胞系 Caco-2 人结肠腺癌细胞 具有分化的肠上皮细胞特征和重要的药物转运与代谢酶 MDCK 狗肾上皮细胞系 Caco-2药物吸收模型的创建人Dr. R.T. Borchardt和他的部分研究团队 Caco-2模型的制备过程 试验结果---渗透能力 吸收较好的药物： Papp ﹥ 2×10-6 Testosterone：1.0×10-5 cm/s Propranolol: 2.86×10-5cm/s 吸收差药物： Papp ﹤ 10-6 Mannitol：1.0×10-7 cm/s Atenolol: Papp= 4.55×10-7 cm/s Brain Blood Barrier（BBB） 内皮细胞和星形胶质细胞的相互作用 紧密连接（tight junction）的结构 药物排出 肾排出：超滤机制 肾排出因素：PPB 和 Papp 胆汁分泌和肠肝循环 肝脏处置药物的基本途径 药物经胆汁排出的细胞模型--- OATP2/MRP2 双转染 MDCK细胞单层 药物的肝脏代谢 药物代谢的基本过程 I相代谢关键酶---细胞色素P450 细胞色素P450 (CYP)家族 CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 and CYP3A4 NADPH依赖的氧化酶 CYP3A4 是药物的主要代谢酶 ~50%已知药物通过CYP3A4代谢 II 相代谢关键酶 UDP-依赖葡糖醛酸基转移酶(UGT) 苯酚磺基转移酶 (PST) 雌激素磺基转移酶 (EST) 谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) 一些细胞抗氧化酶 三种肝细胞制品及代谢分析 药物肝脏代谢稳定性分析过程 药物毒性 药物毒性评价的基本方式---细胞活力分析 细胞生长 细胞能荷 线粒体活性---MTT分析 细胞氧化还原状态---谷胱甘肽含量分析 细胞特征性功能 蛋白质合成 核酸合成 吞噬、排除外来分子能力等 细胞膜完整性---胞浆酶活性分析 MTT细胞活力分析 原理： 线粒体酶将探针分子MTT*还原成为一种蓝色脂溶性染料formazan（吸收波长550nm） 线粒体活性越高，转化能力越强 实验方法：将MTT加入到细胞培养液中，反应一段时间后，用有机溶剂溶解产生的formazan，然后用酶标仪测定 550 nm吸光度. 特点：方法简单可靠，费用低，高通量 药物毒性分析过程 线粒体毒性模型 Early Prediction of Hepatotoxicity Through Technological Development World Pharmaceutical Congress, June, 2010 关于药物毒性分析数据 毒性分析的结果是LD50或IC50或EC50，表示药物导致细胞活力降低一半时需要的浓度 LD50或IC50或EC50越小，药物毒性越大 每种细胞活力分析方法都具有片面性，多种方法测定一种化合物毒性是有益的 进行药物毒性分析时，推荐使用人源的原代完整肝细胞，数据可靠性高 当使用永生化细胞和肿瘤细胞时，由于这些细胞(特别是肿瘤细胞)的药物代谢能力较差，因此得到的细胞毒性数据是一种“本征毒性(intrinsic toxicity)”。将实验数据推广应用时，注意补偿不同组织细胞的代谢能力。 药物毒性和药物-药物相互作用 排出抑制型相互作用： 药物1抑制药物2的排出，导致药物2浓度过高产生毒性 代谢抑制型相互作用 药物1抑制药物2的代谢，导致药物2浓度过高产生毒性 代谢诱导型相互作用 药物2诱导药物2的代谢，导致