Oct4过表达对小鼠胚胎干细胞稳定性的影响.docVIP

Oct4过表达对小鼠胚胎干细胞稳定性的影响 郁烔峰 夏梦 李冬娜 任立成 海南医学院基础医学与生命科学院 海南医学院基础医学与生命科学院生物学教研室 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 目的:初步研究Oct4过表达在维持体外培养胚胎干细胞多潜能性和自我更新的作用。方法:将Oct4基因构建到哺乳动物细胞高效表达载体上, 对胚胎干细胞进行外源基因转染, 并以绿色荧光蛋白为报告基因;进一步通过形态学方法和碱性磷酸酶活性鉴定, 分析Oct4基因在胚胎干细胞中的过表达对干细胞的稳定性的影响。结果:在荧光显微镜下观察, 通过GFP的高水平表达, 测定Oct4基因实现在胚胎干细胞中的过表达;过表达Oct4基因胚胎干细胞增殖缓慢, 并具有较高碱性磷酸酶活性。结论:Oct4基因在胚胎干细胞中的过表达有利于胚胎干细胞的自稳性。 关键词： Oct4; 胚胎干细胞; 自稳性; 基因过表达; 碱性磷酸酶; 收稿日期：2017-06-05 基金：国家级大学生创新课题项目 (201311810044) The Influence on the Mouse Stem Cells Stability with Oct4 Over-expression YU Tongfeng XIA Meng LI Dongna Hainan Medical University; Abstract： Objective:In order to investigate the functions of Oct4 in maintaining pluripotent ability and renewal of the stem cells cultured in vitro.Methods:The high efficient expression vector for Oct4 was constructed, and transferred into stem cells, companying GFP (Green Fluorescent Protein) as the reporter gene;the stability of stem cells over expressed Oct4 were analyzed with the morphological method and the alkaline phosphatase activity.Results:Oct4 was over expressed in stem cells determined with GFP expression level observed under fluorescence microscope;the multiplication level of stem cells over expressed Oct4 were slower with high level of alkaline phosphatase activity compared with the control stem cells.Conclusion:Oct4 over expression was helpful for the stem cells self-renewal. Keyword： Oct4; Embryonic Stem Cells (ESc) ; Self-renewal; Gene Over-expression; Alkaline phosphatase (APK) ; Received： 2017-06-05 哺乳动物在胚胎发育过程中受着多种基因的严密调控, 以保证其有序地进行组织分化和个体发育, Oct4基因就是其中一个关键基因[1]。Oct4主要表达于胚胎干细胞及生殖干细胞中, 对于维持胚胎干细胞的多潜能性和自我更新具有极其重要的作用。它是人们发现最早也是最重要的维持胚胎干细胞多潜能性和自我更新的关键基因[5]。体外研究发现, Oct4随着组织细胞的分化其表达降低或消失;沉默Oct4基因, 鼠和人胚胎干细胞会向滋养层细胞分化, 这种维持胚胎干细胞多潜能性的功能是剂量依赖性的。作为维持干细胞多潜能性和自我更新的关键基因之一, 它的功能和调控机制将会随着研究工作的逐步深入越来越清晰。 为了进一步认识Oct4在维持体外培养胚胎干细胞多潜能性和自我更新的作用, 笔者将Oct4基因构建到高表达载体上, 对胚胎干细胞进行外源基因转染, 实现Oct4基因在胚胎干细胞中的过表达, 研究发现Oct4基因在胚胎干细胞中的过度表达有利于胚胎干