水稻OsZFP互作蛋白的筛选与鉴定.docVIP

水稻OsZFP互作蛋白的筛选与鉴定 郑秀文 崔鹏 石嘉伟 杨静静 陈敏敏 郑瑶 许玲 刘宏波 浙江农林大学农业与食品科学学院 浙江理工大学生命科学学院 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： CCHC型锌指结构蛋白Os ZFP参与调控水稻Oryza sativa侧根的生长发育, 但其相关互作蛋白及调控机制未知。以水稻‘日本晴’‘Nipponbare’为试验材料, 克隆了Os ZFP基因, 利用Eco RI和Sal I酶切位点构建酵母双杂交钓饵表达载体p GBKT7+Os ZFP, 验证该表达载体对酵母菌株Y2H无毒性及报告基因自激活现象;采用酵母双杂交技术, 从已构建的水稻c DNA文库中筛选到1个阳性互作蛋白, 经美国国家生物技术信息中心数据库 (NCBI) 同源性比对, 鉴定为含有T-complex polypeptide 1 (TCP-1) 结构域的分子伴侣蛋白第7个亚基 (Os06g0687700) , 命名为chaperonin containing TCP-1 eta subunit (CCT-eta) , 进而通过酵母一对一回复验证该互作蛋白。基于CCT-eta亚基与Os ZFP蛋白互作, 推测分子伴侣蛋白亚基CCT-eta可能参与调控水稻侧根的生长发育。 关键词： 植物学; 水稻; 调控蛋白; 载体构建; 酵母双杂交; 蛋白互作; 作者简介：郑秀文, 从事水稻根系发育基因功能研究。E-mail:1327158979@。 作者简介：刘宏波, 副教授, 博士, 从事作物水稻根系发育与逆境相关基因功能研究。E-mail:hbliu@ 收稿日期：2016-10-30 基金：国家自然科学基金青年基金资助项目 Screening and identification of a protein for controlling lateral root development in Oryza sativa ZHENG Xiuwen CUI Peng SHI Jiawei YANG Jingjing CHEN Minmin ZHENG Yao XU Ling LIU Hongbo School of Agricultural and Food Sciences , Zhejiang A F University; School of Life Science, Zhejiang Sci-Tech University; Abstract： Os ZFP, a CCHC-type zinc finger protein, has reportedly participated in lateral root development in rice. To determine the molecular mechanism and its interacting proteins in a regulated network, the Os ZFP gene from Oryza sativa. ‘Nipponbare was cloned, and then a yeast bait vector, p GBKT7 + Os ZFP, was constructed by Eco RI and Sal I for c DNA library screening of rice. Results showed no toxicity or autoactivation with transformation of the Y2 H strain containing the p GBKT7 + Os ZFP bait vector. In a yeast two-hybrid assay, a positive interacted protein was obtained and confirmed from the c DNA library. Sequencing and homologous alignment from the National Center for Biotechnology Information (NCBI) showed that the interacting protein (named chaperonin containing a T-complex polypeptide 1 (TCP-1) eta subunit, CCT-eta) was the eta subunit of the chaperone which