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五叶绿体的分离与荧光观察
实验五 叶绿体的分离与荧光观察 一. 实验目的 1 .通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理与方法;了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途 2 .了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。 二 实验原理 采用差速离心分离细胞器; 沉降顺序:核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体; 叶绿体具有荧光现象,可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体,可采用徒手切片观察 其形态和分布; 三、实验用品 1.器材 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片 2.材料 新鲜菠菜叶 3.试剂 0.35mol/L氯化钠溶液 四、实验方法 (一)叶绿体的分离与观察 取新嫩菠菜叶,洗净檫干、去梗,称30g,分批放入研钵。 加入0.35mol/L氯化钠溶液, 共150ml,研磨,制成匀浆; 将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中; 取滤液4ml在1000r/min离心2min,取上清; 上清液3000r/min离心5min.去上清,沉淀即为叶绿体; 加0.35mol/L氯化钠溶液悬浮沉淀; 取叶绿体悬液1滴于载玻片上,加盖片: 普通光镜下观察;荧光显微镜下演示 (二)菠菜叶徒手切片观察 新嫩菠菜叶斜切面1片,0.35mol/L氯化钠溶液1滴;加盖片轻压:光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布;荧光显微镜下演示。 五 实验结果与分析 1.简述:叶绿体的分离原理和方法; 2 .绘图:菠菜叶肉细胞的形态,显示叶绿体。 * Low speed High speed Differential centrifugation * * *
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