浅析基因表达干扰技术microsoft powerpoint 演示文稿.pptVIP

* （三）siRNA的导入 1.脂质体或电穿孔 2.病毒携带 3.细胞穿透肽 （四）RNAi沉默效果的检测 检测mRNA或蛋白质 * （五）RNAi的应用 1.基因功能的研究 2.基因剔除 3.基因治疗 4.细胞信号转导途径分析 5.药物开发 * 四、微RNA（miRNA） 是一组短小，一般为20~24个核苷酸组成，本身不具有开放阅读框架，具有高度保守性、时序性和组织特异性的小分子RNA。 * miR-#（#代表数字）表示miRNA mir-#（#代表数字）表示相应的编码基因 （一） miRNA的命名 * （二）miRNA的作用机制 1.起始阶段：细胞内源性基因→单链初级转录产物 2.成熟阶段：单链初级转录产物→70核苷酸前体miRNA → 胞质→21核苷酸的miRNA 3.功能阶段：miRNA+蛋白质→核糖核蛋白复合物→ (Pri-miRNA) (Pre-miRNA) 抑制mRNA翻译 调节基因表达 * * （三）siRNA与microRNA的区别 共同点 ① 由22个左右的核苷酸组成 ② 是Dicer酶的产物 ③ 需Argonate家族蛋白的存在 ④ 与RISC形成复合物起干扰、调节作用 ⑤ 可在转录后、翻译水平上干扰靶mRNA * siRNA与microRNA的不同 siRNA microRNA 外源性 内源性 由长dsRNA经Dicer酶切割得到 由pre-miRNA经Dicer酶切割而来 双链 单链 与靶mRNA完全互补配对 与靶mRNA并不完全互补 AGO2蛋白 AGO1蛋白 降解mRNA而抑制蛋白质翻译 阻止mRNA的翻译而不降解靶 mRNA 抑制转座子活性和病毒感染 表达具有时序性、保守性和 组织特异性 * （四）miRNA的生物学功能 miRNA与生物体的阶段性发育密切相关，可以使特异基因在翻译水平被抑制 miRNA与肿瘤的发生有关，起抑癌基因作用 * 基因表达干扰技术 * 基因表达干扰技术 二、核酶与脱氧核酶 三、小干扰RNA 四、微RNA 一、反义核酸技术 * 一、反义核酸技术 概念: 反义核酸:是根据碱基互补原理设计的,针对 特定靶序列互补的DNA或RNA片段，通过与特定靶序列结合，从而抑制特定基因的表达。 * 反义核酸技术:是根据碱基互补原理，用人工合成或生物体内合成的特定互补的DNA或RNA片段抑制或封闭基因表达的技术 种类：反义DNA 反义RNA 来源：人工合成 生物合成 * （一）反义寡核苷酸(反义DNA)（ASON）技术 反义DNA:是人工合成的与待封闭基因的某一区段互补的正常或化学修饰的DNA片段，用来抑制或封闭这一基因的表达。 * 1.反义寡核苷酸的作用机制 (1) 抑制mRNA的翻译 (2) 抑制复制或转录 (3) 抑制蛋白质的加工、修饰及功能表达 * 降解 反义核酸 靶核酸 二聚体 空间阻碍 碱基互补 抑制基因表达 * * 2.反义寡核苷酸的给药途径 （1）直接作用于培养细胞 （直接进入细胞） （2）结合L-多聚赖氨酸或脂质体进入细胞 （通过载体进入细胞） （3）动物模型则可通过静脉、腹腔、皮下、 肌肉、瘤体内注射或气雾吸入等途径 * （二）反义RNA技术 反义RNA 是指能和mRNA完全互补的小分子RNA片段，其与mRNA结合后可影响mRNA的正常修饰和翻译，从而调节基因表达。 * 1.反义RNA的作用机制 (1) 抑制DNA复制：与引物RNA结合，抑制复制 (2) 阻止目的mRNA的成熟及向胞浆内转运 与mRNA互补结合影响加帽、剪接和加尾 (3) 抑制mRNA翻译 与5′端SD