多头带绦虫脑多头蚴cDNA表达文库的构建及初步分析.pdfVIP

第 18卷第 3期 寄生虫与医学 昆虫学报 Vo1．18．No．3 20i1年 9月 ActaParasito1．Med．Entomo1．Sin Sep．，2011 doi：10．3969／j．issn．1005-05O7．2011．03．003 多头带绦虫脑 多头蚴 cDNA表达 文库 的构建及初步分析 术 李文卉 王建魁 ’盖文燕 姚菊霞 曲自刚 贾万忠 罗建勋 RaduBlaga 付宝权 (1．甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2．中国农业科学 院兰州兽 医研究所 ，家畜疫病 病原生物学 国家重点实验室 ，农业部兽医公共卫生重点开放实验室 ，甘肃省动物寄生虫病 重点实验 室 ，兰州 730046；3．兰卅f市七里河区动物疫病预防控制 中心 ，兰州 730050； 4．UniversityofAgriculturalSciencesandVeterinaryMedicine，Cluj-Napoca 400372，Romania) 摘要 从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总 RNA，以 Oligo (dT)纤维素柱纯化 mRNA，利用 Lambda ZAPIIXR文库构建试剂盒构建 了脑多头蚴 cDNA表达文库 。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行 PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小 ，鉴定文库质量 。结果表 明脑 多头蚴 cDNA表达文库 的原 始库容量为 1．0X10。pfu，扩增后文库滴度为 1．6X10 pfu／mL。随机挑选 的 165个噬菌斑克 隆中，0．25kb 以上的克隆 155个 ，重组率为 93．9％，对其 中0．5kb以上的 115个克隆测序共获得 104个表达序列标签 (EST)，分析后得到96个单一 EST序列 (UniqueEST)，其 中2O个 EST与绦虫基因有同源性 ，38个 EST与 吸虫基 因有同源性 ，4个 EST与线虫基 因有 同源性 ，17个 EST与其他物种有 同源性 ，其余 l7个 EST没有 同源基因。这些 EST编码 的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴 Tml6抗原 、猪带绦虫副肌球蛋 白、猪带绦虫 免疫原蛋 白Ts76等绦虫抗原的同源蛋 白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋 白、肌动蛋白、核糖体蛋 白等 同源蛋 白。 关键词 多头带绦虫 ；脑多头蚴 ；cDNA表达文库 ；表达序列标签 脑多头蚴病俗称脑包虫病，是 由多头带绦虫 (Edwardseta1．，1982；Verstereta1．，1982；张 Coenuruscerebralis的幼虫脑多头蚴寄生于牛、羊 文宝等 ，1991；窦兰清等，1996，1997)，但 是 等中间宿主的大脑 、脊髓等中枢神经系统而引起 难于大量生产 。随着分子生物学技术的发展及其 的一种严重致死性人兽共患寄生虫病 。该病不仅 在寄生虫学研究中的应用 ，带科绦虫的许多抗原 给畜牧业生产造成严重的经济损失，而且威胁着 性基因已经被成功克隆，国内外学者根据其他带 人类健康 。目前 已经报道 的应用于脑多头蚴病的 科绦虫 同源基因设计引物从多头带绦虫幼虫克隆 免疫学诊断方法主要有 间接血凝试验 (IHA)、 并表达 了多头带绦虫45m、Tml6及 Tml8基 因， 酶联免疫 吸附试验 (ELISA)、斑点免疫 金渗滤 其表达 的重组蛋 白均具有免疫保护性 (由弘等 ， 试验 、斑 点免疫 吸 附试 验等 (Daoudeta1．， 2008；张壮 志 等 ，2009；Gaucieta1．，2008； 1982；张西 臣等 ，1986；Doganayeta1．，1999； Varcasiaeta1．，2009)。为 了获得更多多头带 绦 王春仁等，2001)，但是 由于所用 的诊 断抗原主 虫抗原性基因，本研究通过构建多头带绦虫脑多 要是原头节和囊液抗原，这些天然抗原