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柱层析与薄层层析的吸附剂和洗脱剂 (Swr据网络资源整理 支持小木虫) 根据待分离组分的结构和性质选择合适的吸附剂和洗脱剂 是分离成败的关键。 1．吸附剂的要求 ①对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应，在洗脱剂中也不会溶解。 ②对待分离组分能够进行可逆的吸附，同时具有足够的吸附力，使组分在固定相 与流动相之间能最快地达到平衡。 ③颗粒形状均匀，大小适当，以保证洗脱剂能够以一定的流速（一般为 -1 ）通过色谱柱。 1.5mL.min ④材料易得，价格便宜而且是无色的，以便于观察。 2、常用吸附剂的种类 氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙（镁）、淀粉、纤维素、蔗糖 和活性炭等。 3 、几种常见吸附剂的特性 （1）氧化铝：市售的层析用氧化铝有碱性、中性和酸性三种类型，粒度规 格大多为100～150 目。 碱性氧化铝（pH9—10 ）：适用于碱性物质（如胺、生物碱）和对酸敏感的 样品，这种吸附剂能引起被吸附的醛、酮的缩合、酯和内酯的水解、醇羟基的脱 水、乙酰糖的去乙酰化等不良副反应。所以，这些化合物不宜用碱性氧化铝分离。 酸性氧化铝（pH3.5—4.5 ）：适用于酸性物质如有机酸、氨基酸等以及色素 和醛类化合物的分离。 中性氧化铝（pH7—7.5 ）：适用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在碱性 介质中不稳定的物质如酯、内酯等的分离，也可以用来分离弱的有机酸和碱等。 （2 ）硅胶：硅胶是硅酸的部分脱水后的产物，其成分是 SiO ·xH O，又叫 2 2 缩水硅酸。柱色谱用硅胶一般不含粘合剂。 （3 ）聚酰胺：色谱用聚酰胺主要又锦纶6 （聚己内酰胺）和锦纶66 （聚己 二酰己二胺）两种，分子量一般在 16000～20000 ，其亲水性和亲脂性均较好， 因此既可分离水溶性成份，也可分离脂溶性成分。可溶于浓盐酸、甲酸及热的乙 酸、甲酰胺和二甲基甲酰胺中；微溶于乙酸和苯酚等；不溶于醇、氯仿、丙酮、 乙醚、苯等；对碱稳定，对强酸可水解。 聚酰胺色谱的原理：兼具吸附色谱和分配色谱的功能。采用强极性洗脱剂时 主要为吸附色谱——正相色谱；采用弱极性洗脱剂时主要为分配色谱——反相色 谱。 分离对象：能与聚酰胺形成氢键的化合物，如酚类、酸类、醌类、硝基化合 物及含羟基、氨基、亚氨基的化合物及腈和醛等类化合物。 聚酰胺在水中吸附能力的规律：形成氢键的基团(如：酚经基、按基、酪基、 硝基等)越多，则吸附力越强。如：丁二酸＞丁酸 形成氢键的位置与吸附力有很 大关系。对位、间位酚羟基使吸附力增大，邻位使吸附力减小。芳香核、共轭双 键多者吸附力大，少者吸附人小。若形成分了内氢键，则使化合物的吸附力减小。 （4 ）硅酸镁：中性硅酸镁的吸附特性介于氧化铝和硅胶之间，主要用于分 离甾体化合物和某些糖类衍生物。为了得到中性硅酸镁，用前先用稀盐酸，然后 用醋酸洗涤，最后用甲醇和蒸馏水彻底洗涤至中性。 4、实验操作 吸附剂用量的确定→柱子的选择→装柱→柱留体积的测量→加 样或拌样→洗脱→分部收集→检测→合并→浓缩 氧化铝：一般选择中性，粒度 150～200 目，超过220 目需加压；一般用量1g 样品/20～50g，特例1g 样品/100～200g 硅胶：吸附色谱——1g 样品/20～50g ，特例1g 样品/500～1000g，用前最好120 烘24h ，可不做活性测定。分配色谱——1g 样品/100～1000g，特例1g样品/10000g 。 色谱柱的选择： 有玻璃柱和不锈钢柱两种，一般不使用有机玻璃柱，实验室常用玻璃柱；径 长比一般为1:10～1 :20，特例1:40；内壁光滑均匀，上下粗细一样，管壁无裂缝， 活塞密封良好；根据吸附剂用量（体积）确定柱子的大小，一般吸附剂应填充到 柱子体积的1/4～1/5 左右。 装柱：有干装法和湿装法两种。 干装法 在下端减压抽气的同时，将吸附剂通过长径漏斗缓缓到入柱内。 湿装法 ①准确加入一定体积的溶剂，然后缓慢加入吸附剂，必要时可轻敲柱壁，排除多