液相色谱仪器操作及维护.pdf

液相色谱教程 液相色谱教程 相色谱仪器操作及维护 相色谱仪器操作及维护 2008 Waters Corporation 启动液相色谱仪器的流程 启动液相色谱仪器的流程 § 开启HPLC系统各个设备的电源 打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过 自检后，打开计算机，启动色谱管理软件 § 准备流动相 过滤,脱气 § 色谱泵排气 用新配制的流动相灌注泵 2008 Waters Corporation 2 启动液相色谱仪器的流程 启动液相色谱仪器的流程 § 用准备好的流动相平衡色谱系统 可在泵的控制面板上设定流速参数(15×5泵需在软件控制下操 作) 系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作 § 准备样品 用流动相溶样或重组样品 § 编制仪器方法, 始实验 2008 Waters Corporation 3 液相色谱对流动相的要求 液相色谱对流动相的要求 § 色谱柱对流动相的要求 — 过滤除去微粒 — 纯度的要求 o 超纯 ，或用KMnO 处理过的双蒸 4 o 有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低)， 并与填料相匹配 — 缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内 — 缓冲液 （盐）的浓度不要太高(≤100mM) — 流动相对样品的溶解度 o 调整有机溶剂和 的比例 o 最好用流动相溶样 2008 Waters Corporation 4 液相色谱对流动相的要求 液相色谱对流动相的要求 § 液相色谱仪器对流动相的要求 —与检测器匹配 —脱气 —避免用含卤素离子的缓冲盐 （不锈钢系统） —溶剂的粘度 —防止细菌的生长 2008 Waters Corporation 5 流动相的脱气 流动相的脱气 § 流动相脱气的目的 — 使色谱泵的输液准确 o 输液量均匀准确，并且脉动减小 o 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 — 提高检测的性能 o 防止气泡引起的尖峰 o 基线稳定，信噪比增加 o 溶剂的紫外吸收本底降低 — 保护色谱柱 o 减少死体积 o 防止填料的氧化 2008 Waters Corporation 6 流动相脱气的方法 流动相脱气的方法 § 加热 — 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动 相组成的变化 § 抽真空 — 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果 § 超声波振荡 — 简单，但效果不够理想；超声时间不要太长(1分钟左右即可) § 通惰性气体 （一般用氦气） — 可保持在线连续脱气，多用于低压梯度 § 在线脱气机 （