仪器分析 平面色谱法1.pptVIP

平面色谱法 plane chromatography 色谱分类 GC LC SFC 概述 平面色谱法是在平面上进行分离的一种色谱方法 是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法 特点： 方便、快速、成本较低，易于推广 样品的预处理比较简单 应用范围广 展开剂选择范围宽 历史简介 1938年，俄国人Izmailov和Shraiber首先实现了在氧化铝薄膜上分离一种天然产物。 1949年，两位美国化学家报导了用薄层色谱法成功地分离了精油中的萜烯。 1958年，德国化学家Stahl系统描述了用作涂布薄层的材料（薄层色谱固定相）和涂板设备，对薄层色谱技术也进行了规范化描述。 Stahl于1965年出版了《薄层色谱法》一书。 20世纪80年代 出现了仪器化薄层色谱法，薄层色谱的每一步均用仪器来代替以往的手工操作，再配以薄层扫描仪，这样就使薄层色谱法的定量结果的重现性和准确性大大提高。 平面色谱参数 定性参数 相平衡参数 面效参数 分离参数 （一）定性参数 比移值（Rf） Rf = L/ L0 相对比移值（Rr） Rr = Rf(i) / Rf(s) = Li / Ls （二）相平衡参数 思考题： 下列色谱参数中数值在0～1之间的是（ ） A．Rf B．r C．R′ D．k （三）面效参数 理论塔板数 L为原点到斑点中心的距离，W为组分斑点的纵向宽度。 塔板高度 H = L0 / n L0为斑点到溶剂前沿的距离 （四）分离参数 分离度（resolution R） 分离数（separation number SN） （四）分离参数 分离数（separation number SN） 在相邻峰的分离度为1.177时，在Rf=0及Rf=1两种组分的色谱峰间能容纳的色谱峰数。SN越大，薄层板的容量越大。 第二节 薄层色谱法（thin layer chromatography; TLC） 将细粉状的吸附剂或载体（固定相）涂布于玻璃板、塑料板或铝箔上，成一均匀薄层并进行活化，将混合物样品与对照品溶液点在同一薄板的一端（原点），在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相或展开剂）展开，显色后样品斑点与对照品斑点进行比较，用于定性鉴别或含量测定的方法。 特点 分离能力强，斑点集中 灵敏度高，?g ng 展开时间短，min 试样预处理简单，对被分离组分性质没有限制 上样量较大 所用仪器简单，操作方便 一、薄层色谱法的主要类型 吸附薄层色谱法 固定相为吸附剂 一般极性大的组分移动速度慢 分配薄层色谱法 固定相为液体（吸附于载体上），固定相极性大于流动相极性时为正相色谱 在正相色谱中极性大的组分移动速度慢 二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 （一）吸附剂 硅胶 氧化铝 硅胶具微酸性?适于分离酸性和中性物质 氧化铝具微碱性?适于分离碱性和中性物质 硅胶 表面带有硅醇基呈弱酸性，硅醇基与极性基团形成氢键而表现其吸附性能，不同组分的极性基团因与硅醇基形成氢键的能力不同而被分离。 硅胶吸水形成水合硅醇基而失去吸附能力，加热（105～110℃）可失去水而提高活度，增加吸附能力，这一过程称为“活化” 。 含水量越多，级数越高，吸附能力越弱，同一组分在此硅胶上的Rf值越大。 氧化铝和硅胶含水量与活性的比较 与硅胶的分离效率有关的是 粒度和孔径 硅胶粒度越小，均匀性越好，分离效率越高； 表面积 硅胶表面积越大，则与样品之间的相互作用越强，即吸附力越强。 氧化铝 碱性（pH9~10）?分离碱性（生物碱）、中性物质 中性（pH7.5）?广泛 酸性（pH4~5）?酸性、中性 商品出售的薄层色谱用氧化铝和硅胶有： 氧化铝（硅胶） G，表示含有粘合剂煅石膏； 氧化铝（硅胶） H，表示不含有粘合剂； 氧化铝（硅胶）HF254，表示不含粘合剂而含有荧光物质；在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 （二）展开剂 薄层色谱中的展开是在一个具有一定空间和形状的密闭容器中，展开剂沿薄层（固定相）运动。 通过组分分子与展开剂分子争夺吸附剂表面活性中心而达到分离。 展开剂的选择 主要是根据被分离物质的极性、吸附剂的活度和展开剂的极性三者的相对关系进行选择 先用单一溶剂展开，然后根据分离效果进行调整，经常使用混合展开剂 分离酸碱组分时，展开中加入少量酸、碱。 化合物极性、吸附剂活度和展开剂极性间的关系 三、薄层色谱操作方法 薄层板制备 点样