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仪器分析 高效液相色谱法 2
高效液相色谱法 high performance liquid chromatography 高效液相色谱仪 一、输液系统 高压输液泵 输液系统 等度(isocratic) 和梯度 (gradient) 洗脱 等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定。 梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制改变流动相的组成（溶剂的极性、离子强度和pH值等），使所有组分都在适宜条件下获得分离。 二、分离和进样系统 进样器 三、检测系统 检测系统 检测系统 （三）荧光检测器 检测原理 F=2.3QKI0εCl 灵敏度比紫外检测器高，只适合于能产生荧光的物质。 检测系统 安培检测器应用最广 电导检测器常用作离子色谱的检测器 检测系统 （四）安培检测器 检测原理 检测灵敏度高，适合于测定具有氧化还原性质的物质 检测系统 （五） 蒸发光散射检测器（evaporative light scattering detector； ELSD）是90年代出现的最新型的通用型检测器。理论上这种检测器可用于挥发性低于流动相的任何样品组分的检测，主要用于糖类、高分子化合物、高级脂肪酸及甾体类等几十类化合物。 蒸发光散射检测器示意图 ELSD 散射光强I与进入检测器的气溶胶中组分的质量m 的关系为 I=kmb k、b是二个与实验条件有关的常数。取对数： lgI=blgm +lgk 四、数据处理和计算机控制系统 第四节 高效液相色谱分析方法 一、定性分析方法 色谱鉴定利用春物质和样品的保留时间或相对保留时间相互对照。 化学鉴定法 利用专属性化学反应对分离后收集的组分定性 两谱联用 HPLC-MS HPLC-FTIR 二、定量分析 外标法 工作曲线法 外标一点法 内标法 选择与组分完全分开，保留时间相近的纯物质作内标 工作曲线法 内标一点法（内标对比法） ? 校正因子法 三、高效液相色谱法分离方法的选择 P440表 * * 进样器 高压泵 色谱柱 检测器 数据处理器和显示器 往复式活塞泵 自溶剂瓶 至液相系统 充样位置(Load) 进样位置(Inject) 至废液 定量环（固定体积） 来自泵 至色谱柱 进样针 手动进样器——六通阀 至色谱柱 来自泵 至废液 检测器的作用是把色谱洗脱液中组分的量转变成电信号 通用型和专属型 （一）主要性能 灵敏度高、噪音低、线性范围宽、重复性好和适用范围广 （二）紫外检测器 检测原理：Lambert-Beer 特点：灵敏度高、噪音低、能用于制备，只能检测有紫外吸收的物质 检测波长流动相截止波长 固定波长 可变波长 二极管阵列 可变波长检测器与二极管阵列检测器 VWD检测器 DAD检测器 光源 入口狭缝 光栅 二极管阵列检测器 流通池 光源 入口狭缝 出口狭缝 流通池 检测器 光栅 三维光谱-色谱图 Absorbance Time Wavelength 伏安检测 电导检测 极谱 库仑 安培 I=nF dN dt 光电管 用计算机控制仪器运行， 自动完成数据采集和分析， 各种参数的计算。 *
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