DPP IV基因影响卵巢癌生物学行为的机制探讨.docVIP

精品论文 参考文献 DPP IV基因影响卵巢癌生物学行为的机制探讨 王忠民1 卢永科2 （1大连妇产医院 辽宁大连 116033；2大连医科大学毒理学研究所 辽宁大连 116021） 【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)30-0009-02 【摘要】 目的 探讨DPP IV基因高表达对卵巢癌细胞系恶性行为的影响及其机制。方法 应用体外增殖能力、黏附和侵袭试验检验HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞恶性行为差异；利用流式细胞技术、吖啶橙染色、DNA ladder、透射电镜以及Western blot 检测Fas/Bcl-2基因蛋白表达水平，探讨HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞中凋亡状况。结果 DPP Ⅳ基因高表达可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附和侵袭能力；同时HODPP Ⅳ细胞的凋亡率、Fas基因蛋白表达水平明显高于HOPcDNA和HO-8910PM细胞(Plt;0.05)；HO-8910PM和HOPcDNA细胞的Bcl-2基因蛋白表达水平明显高于HODPP Ⅳ细胞(Plt;0.05)。结论 DPP Ⅳ基因高表达可抑制卵巢癌细胞的恶性行为；凋亡可能是DPP Ⅳ基因发挥生物学作用机制之一。 【关键词】 DPP Ⅳ基因 凋亡 抑制 卵巢癌 卵巢肿瘤是女性生殖器常见的肿瘤之一，其中恶性卵巢癌约占10％，居女性生殖器恶性肿瘤的第三位，而上皮性卵巢癌是妇产科恶性肿瘤中主要的死亡原因。70%患者在确诊时已近晚期。卵巢癌患者的5年生存率仍然很低。随着分子生物学和肿瘤基础研究的飞跃发展，使人们认识到肿瘤最终是一种基因病。基于此认识人们可以从分子和基因水平探索卵巢癌的病因和发病机制并寻找卵巢癌的诊断和治疗方法。人类DPP IV基因是分子量约110kD的跨膜糖蛋白。随着研究的深入，发现DPP IV基因在肿瘤进展中起重要作用，我们此次探讨DPP IV基因抑制卵巢癌细胞系恶性行为的可能机制。 1 材料与方法 1.1实验材料 细胞系：HO-8910PM卵巢癌细胞系是来自于人类卵巢浆液性乳头状囊腺癌，购于中科院典型培养物保藏委员会细胞库；将真核表达载体PcDAN3.1(+)和全长野生型DPP IV基因通过阳离子脂质体转染HO-8910PM卵巢癌细胞系，命名HODPP IV细胞高表达DPP IV基因。细胞均置于37℃，5%浓度CO2孵育箱中培养。 1.2 试剂 凋亡DNA梯形检测试剂盒(TACS Apoptotic DNA Laddering Kit, Trevigen, Inc)；兔抗人Bcl-2和Fas单克隆购于Sigma公司。 1.3方法 1.3.1 流式细胞(FCM)法测定不同卵巢癌细胞系的凋亡率及细胞周期数据利用Macintosh 650计算机上的Modifit软件分析。细胞凋亡率=凋亡细胞数/总细胞数times;100%。 1.3.2 吖啶橙染色观察细胞凋亡现象 三种细胞分别取5times;104个制备成单细胞悬液，使HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞爬行于玻片后，将配制好的吖啶橙溶液滴于盖玻片上，荧光显微镜观察，摄片。 1.3.3 DNA Ladder 测定 实验方法严格按TACS Apoptotic DNA Laddering Kit操作说明进行。 1.3.4透射电镜观察 透射电镜标本制作参考文献[1]。 1.3.5 Wester blot 检测Fas/Bcl-2基因表达 具体操作参考文献[2]。 1.3.6 不同卵巢癌细胞增殖 具体参考文献[3]。 1.3.7 细胞体外粘附试验 具体操作参考文献[3]。 1.3.8体外细胞侵袭测定 细胞侵袭性测定使用Matrigel侵袭小室，具体操作参考文献[4]。 1.3.9体外细胞趋化能力测定　方法步骤与体外侵袭力测定相同，只是侵袭小室的滤膜不用人工基质胶覆盖。 1.4统计分析 利用SPSS10.0统计软件包进行统计分析。 2 结果 2.1 不同细胞系的凋亡率及细胞周期 HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP Ⅳ细胞在细胞周期G1期前均出现亚二倍体凋亡峰。但是HODPP Ⅳ细胞的凋亡峰更明显。HODPP Ⅳ细胞凋亡率显著高于HO-8910PM、HOPcDNA细胞(Plt;0.05)。 2.2 吖啶橙染色细胞凋亡形态 当HODPP Ⅳ细胞发生凋亡