AHL感应菌株生物检测铜绿假单胞菌变异株.pdfVIP

生堡医堂基志!!!!生!!月!!旦箍竖鲞笠!!期盟堂!丛盟』￡!i塑：Q!!!j望!!：!!!!：Y!!竖：盟!：!! ．短篇论著· AHL感应菌株生物检测铜绿假单胞菌变异株 詹克航岳克筱孙明 陈守文喻子牛 铜绿假单胞菌(Re“如mon口口er昭i加s。)是一种由武汉大学同济医院惠赠。 以N一酰基高丝氨酸内酯(N—acyl—homoserinelactone， 2．主要试剂：非发酵细菌生化编码鉴定微量生 AHL)为信号分子调控自身群体感应行为的人体机化反应管购白(杭州)中国人民解放军浙江省军区 会致病菌¨。。近些年，在临床分离的非发酵病原菌 中，铜绿假单胞菌检出率最高旧o。铜绿假单胞菌的 诊断及合理用药有赖于病原菌的确认，目前国内较 自美国S远ma公司；嘶s 常用的检验方法仍是生化鉴定。但临床分离的铜绿 假单胞菌常在生化反应方面发生较大变异，对于经 验不足者，往往容易造成误诊旧一。多次转接返祖后 酶和各种内切酶以及pMDl8一T载体均购自日本 重新鉴定往往耗时较长，难以及时指导用药。而采 TaKaRa公司。 S 用16rRNA测序进行分子鉴定，虽可靠性高，但也 3．培养基及培养条件：铜绿假单胞菌液体培养 存在耗时较长问题，且成本高，目前国内外仍无法普 遍采用。目前，国内外一些实验室利用生物技术手 段构建了一些对不同AHL分子敏感的报告菌用LB固体培养基；AHL信号分子的蓝白斑检测用 株¨一。，不同的报告菌对酰基侧链长度不同的AHL ABG∞。培养基，28℃培养(或先于35℃培养12h， 分子的敏感性不同，可实现对AHL信号的灵敏检 测。本研究首次利用AHL信号感应菌株根癌土壤 ￡“袱如c如瑚)保存用LB固体培养基，4℃冷藏(每月 杆菌wCF47，对铜绿假单胞菌临床分离株及其生化 反应变异株的AHL信号表达特性进行了系统研究， 为利用AHL信号感应菌株对该菌进行快速准确检 i贝0提供了一种新方法。 一、材料与方法 的制备：分离自标本的血平板菌株为第1次转接种 1．菌株：铜绿假单胞菌标准菌ATcc27853由 菌株(G1)，挑取血平板上的单菌落转接在MH琼脂 武汉科技大学附属医院检验科惠赠；信号分子感应 上，经37℃过夜培养形成第2次转接种菌株(G2)， 菌株根癌土壤杆菌wcF47(pcF372／pcF218，含有 P跳厶如cz融合基因和fmR基因，卡那霉素抗性、壮 置于4℃冰箱保存。 观霉素抗性、四环素抗性)，由美国康奈尔大学 5．菌株的生化鉴定：按照非发酵细菌生化编码 winans教授惠赠，嗜麦芽窄食单胞菌 鉴定管系列使用说明进行。 (s￡e几o￡rop矗。啪凡口s moftop^沈o)SM56、铜绿假单胞菌 6．PALl06转接种不同次数菌株及其他待测菌 PALl06、PA570、PA591、PA599、PA598、PA593、 生长曲线、pH值变化曲线及信号分子活性曲线的比 PA561、PA568及均为洛钢集团职工医院检验科临 较：从菌种保存平板上取一环菌落直接接种于新鲜 床分离；恶臭假单胞菌(Pse“如mo凡。sp眦：如)Pxl63 LB培养基(500m1)中，37℃、190r／min摇床培养， 定时取样测A鲫、pH值和信号分子活性。 作者单位：430070武汉，华中农业大学农业微生物学国家重点 7．A