1型HIV感染多重PCR检测方法的建立.pdfVIP

生堡撞墼鬓整爱盍!塑燕§基墓≥兰蠢笼§塑彗叁逸i缝堑煎：蠡鞭墼至堂。隧墼：窆l垒1 ·病毒基因检测． 1型HIV感染多重PCR检测方法的建立 代丽丽 陈德喜石英魏飞力 绳波昊弧松柳雅寇 张洪海梁连拳张彤昊昊 【摘要】 目的建立检测人免疫缺陷病毒l型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重逆转录 DNA PCR(RT—PCR)方法。方法针对HIV-l的剿、叫和印4l区设计3套引物，分别建立检测HIV 的多鍪纛咒R纛援测珏掰RNA酶多重毅’-咒R方法；泼建立静戏挂方法对l瓣鲷珏lV撬体粥牲患者 及50例阴性患者进行检测，以EusA／免疫印迹实验(we8t朗b10t，wB)相结合的抗体枪测结果 (EuSA／wB)为盒标准，计算所建立的PCR方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准 确牲、霹重复缝；分别震建毫鹃多重nPcR颡多重雕’一羚R捡溺73份阳性标本，并与HlV．1核酸痔列 扩增技术(NASBA法)进行稳测敏感度的眈较；对43份检测阳能的DNA标本进行亚型浆定。结采 多重nPCR的检测敏感度为98．O％(147／150)，多重RT-PcR的敏感度为91．3％(137／150)，2种方法 的特努度均为loo妫(50／50)，多重nPCR翻多重RT·KR的阳性预测值分别为9s．O％(147／150)翻 91．3％(137／150)，阴性预测後均为l∞％(5Q／50)，潦确毪分别为98．5％稀93．5％。可熬复性分剐 异有统计学意义(矿=17．34，jPo．01)，多重RT·PCR的检测敏感度(79。5％)与NASBA法捆比，差异 DN轰阳缝标本分别隽37傍B’鼹鍪、5餐AE 无统计学意义(矿=疆舛，尹=o．332；检测酶43贽}|lV 亚型和l份Bc贬型。结论成功地建立了多重nPCR和多重RT-PCR方法，操作简便、价格低廉，具 有较黼的敏感度和特异度和可重复性，能覆盖我国最盅要的流行瘸毒株。 【关键词】瓣lV感染；瓣lV．1；聚会藜链反应；遂转录聚合酶链反应 Estab№hIl懒ltof ford呶6叫0fHⅣ·l mlll6pl麟PCR躯say 枞，．矗，删珧．茹f，S埘yi粥， 鬻E|Fei．矗。S}lENs粕。碍珏￥岛。$秘tg。UUYB．珏。z秘A秘G秘o}曙．}菇，黻A魏G￡初嚣-chnn，z壬圭A援s孙ftg。哥玎 H嘛蛳f咖e琳of|n＆ct泌醛D诂e∞e。YoU，AHo咄文。蛳《|。6哟9。chi阮 cD巩cn co删spo磁醒口础．110r：形U月知．层批以：埘以搬毗@伽hm ％es￡ab_lish鞠HIV—l nested 【A酗t嗤ct】Obj扰蜢张 diagrIostica嬲趣yusingmultiplexp01ymer鹤e e魏a主珏f投lcli锺(拜蚝嚣)雒dreverse扭强躲穗砖耱R娶残：＆麓确醛s秘l舭辩￡s“p蠢mefst嚣辨￡i秘g珏lV—l to to were establishannPcRdetectHIVDNA明dHIV desigrIed gene《萨g，叫黼dg—1 m8pectively RNA诵thRT．PC№，nleestablishedPCRdeteclionw躺conductedon150HIV multiplex system seropositive 粕d50semnegative specifie睁，positjve patients．盹esensitiv姆， predictive划ue，negativep捌ictive v越l差e+ae