微生物法生产L色氨酸的研究概况研究.pdfVIP

微生物法生产L．色氨酸的研究概况 杨海军 王健 陈 宁 张克旭 (天津科技大学食品工程系天津300222) 摘要综述了微生物直接发酵法、微生物转化法和酶法生产L广色氨酸的生产方法，详细 介绍了各种方法的研究概况、发展前景，并对各种方法的优缺点进行了比较。 关键词微生物。L广色氨酸 L色氨酸是人和动物体内的重要必需氨基酸，在医药、食品和饲料添加剂等 方面具有广泛的用途。世界市场色氨酸年需求量约为万吨以上，而目前全世界 只有一千吨左右的生产能力，且主要集中在日本、美国等少数国家，仅日本1989 年的销售额就达到25亿日元，因而色氨酸的市场前景巨大。色氨酸的生产最早 主要依靠蛋白质水解法和化学合成法，但是随着对微生物法生产色氨酸研究的 不断深入，微生物法已经走向实用并且处于主导地位。微生物法大体上可以分 为直接发酵法、微生物转化法和酶法。近年来还出现了将直接发酵法与化学合 成法相结合、直接发酵法与转化法相结合生产色氨酸的研究。另外，重组DNA 技术在微生物育种和酶工业上的应用极大地推动了直接发酵法和酶法生产色氨 酸的工业化进程。 1直接发酵法 以葡萄糖、甘蔗糖蜜等廉价原料为碳源，利用优良的色氨酸生产菌种来生产 色氨酸。对这种方法的研究进行的比较早，但在相当长的一段时间内达不到工 业化生产的要求。主要原因是从葡萄糖到色氨酸的生物合成途径比较漫长，其 代谢流也比较弱，而且色氨酸的合成需要多种前体物(如脚等)，若想进一步 提高色氨酸的积累量就必需设法增强合成这些前体物的代谢流。另一方面，色 氨酸生物合成途径中的调控机制比较复杂，除了反馈调节这一粗调系统之外，还 存在着细调系统一弱化子系统。重组DNA技术在微生物育种中的应用，为优良 的色氨酸生产菌株的筛选和产酸水平的提高提供了可靠的技术保障，使微生物 直接发酵法生产色氨酸成为一种廉价的工业化生产方法。 · 1 14· 隆到大肠杆菌中，随每细胞拷贝数增加2卜30，色氨酸合成酶的活性增加150 倍。这种酶活性的增加，必然导致终产物色氨酸积累量增加。日本的Katsumata 养，可产色氨酸35．29／L(亲株产20．19／L)。 利用基因工程技术使大肠杆菌K-12分别带上有缺失的画基因(编码磷酸 葡萄糖异构酶)和正常的画基因，对照培养后发现画一菌株从葡萄糖合成色氨 代谢流，使HM途径得到加强后，将加速NADPH和一些重要的戊糖衍生物的合 成，提高色氨酸生物合成途径中的能量和前体物供给水平而使色氨酸积累量上 而积累副产物吲哚，导致发酵后期耗糖减少、糖代谢受阻的问题。 从大肠杆菌EMS4-C25中分离得到抗反馈调节的色氨酸操纵子，并将其克隆 pTC576转化到大肠杆菌中，构建出的工程菌株在经过17小时的分批发酵后，积 累L广色氨酸169／L。 色氨酸产量提高了54％，达到了669／L。 酵45小时产酸19．59／L。 变的等位基因trpE和serA并比较了含不同等位基因菌株色氨酸的产量，结果表 明含tryE6／serA5基因的菌株产量最高达24．19／L。 · · 1 15 2微生物转化法 使用葡萄糖作为碳源，同时添加合成色氨酸所需的前体物(如氨茴酸、吲哚、 L广丝氨酸等)，利用微生物的色氨酸合成酶系转化前体来合成色氨酸。这种方法 同直接发酵法一样，需要解除生物合成途径中大部分酶所受到的反馈调节，以使 色氨酸能够高浓度蓄积。另外，所添加的前体物大都是抑制微生物生长的，因此 添加量不可过高，一般采取分批少量添加的方法。同时可以筛选前体物的抗性 突变株来提高前体物的添加量。微生物转化法的不足之处在于当转化液中前体 物浓度较高时，转化率有所下降，通过分批次少量流加前体可以减少其抑制作 用。另外，前体物的价格比较昂贵，不利于降低成本。 这种方法很早就投入了工业化生产，目前世界上最大的色氨酸生产厂家日 转化为色氨酸的生产方法。 日本Inui 物素的培养基中进行培养，可产色氨酸3．59／L(亲株产0．089／L) 日本的Vajima 其导人具有5．盯的枯草杆菌中，转化后脚合成酶的活力比原菌提高3．9倍。 在含邻氨基苯甲酸800ppm时