我国小型猪内源性反转录病毒的相关研讨.pdfVIP

202 中国实验动物学套第七届学术年会论支集2006年9月 我国小型猪内源性反转录病毒的相关研究 马玉媛1吕茂民1吴建敏。2丁芳1徐述1阳玉彪1郭艳茹1田克恭3章金刚1 (1军事医学科学院野战输血研究所北京100850； 2广西壮族自治区兽医研究所南宁530001{3农业部兽医诊断中心，北京100094) 随着移植医学和免疫学研究的进展，也由于人源供体器官的短缺，猪被选定为最合适的异种移植供体。现今t猪心脏瓣 膜已成功地移植入人体内“1，猪皮肤己作为烧伤病人的暂时覆盖物，猪胰岛细胞已被植入糖尿病人体内，猪一人异种移植已 展现出十分诱人的前景。 然而．猪内源性反转录病毒(Porcineendogenous 了人们对异种移植病原安全性的广泛关注，人们担心带有PERV的猪的细胞或器官一旦植入高度免疫抑制的人体内会否突破 种间屏障造成人源大流行“”。因此，猪内源性病毒的研究与检测是猪一人异种器官移植、人用猪源生物制品等生物安全性 的基础，也是进行高等级医学实验的前提。 我国有着异常丰富的猪种资源，特有小型猪种更是适合医学实验研究和人类异种移植的首选供体，我国已经启动和开 展了小型猪资源开发利用、异种移植的基础研究等项目。本文仅就我们近年来有关PERV的研究情况做以简要总结t供参考a 1．中国特有小型猪内源性反转录病毒存在状况的调查 在全国范围内首次大规模开展了我国小型猪中内源性反转录病毒存在状况的调查，系统检测分]昕PERV 在我国小型猪中存在与表达情况。 技术，并对其特异性、敏感性等进行了研究”1。采集了6个省市10个单位、5个品种、17个猪群348份外 周血样品，根据通用的env基因分型方法，用PCR和RT-PCR方法检测PERV 小型猪、五指山猪、巴马小型猪、贵州小型猪、中国实验小型猪等我国主要小型猪基因组中的存在与表达 情况“”。 构蛋白的存在与表达情况看，小型猪基因组中不仅存在PERv Y1亚群的A、B、C种亚型，但仅 为RNA。上述结果说明，我国小型猪外周血淋巴细胞基因组中存在PERV 有A、B两种亚型能够表达。PERV-A、B、C3种亚型的同时存在，预示着小型猪群中存在着不同亚型病毒重 组的可能性。 2．小型猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞的研究 胞，然后应用PCR及RT-PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定”’。 通过上述方法已成功建立了来自五指山猪、中国实验小型猪、巴马香猪、巴马小型猪及贵州香猪外周 血淋巴细胞的猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞的模型，证实了猪外周血淋巴细胞来源的PERV在体外 也能够感染人源细胞系。 中国实验动物学套第七届擘术年会论文集2005年9月 203 以上实验结果，为研究PERV的生物学特性及病原安全性的评价搭建了技术平台，正在尝试应用上述 反转录病毒细胞感染模型进行抗反转录病毒的药物筛选。 3．猪p日源性反转录病毒gag、env基因的克隆、表达及抗体的制备 分别设计合成了用于扩增PERv gag基因和env基因的引物，成功地克隆并鉴定了中国小型猪来源的 PERV 个氨基酸。来源中国实验小型猪的PERY gag基因序列与其它来源的同源序列相比较，有三个核苷酸存在 ～个是位于N端第1560位的A—c的变异。最终导致Gag蛋白的一级结构发生变异。 AF507940。分别实现了两个基因在大肠杆菌中的表达及初步纯化，并免疫接种家兔，制备了相应的多克隆 抗体；构建了相应的真核表达载体，采用基因免疫的方法接种Balb／C小鼠，筛选获得了特异性的单克隆 抗体杂交瘤细胞株并对单抗进行了系统鉴定。 以上研究，为建立PERV的免疫学监测方法奠定基础，猪内源性反转录病毒的囊膜区在毒株的分型及 病原性上具有一定的意义。 4．猪内源性反转录病毒全序列测定与功能分析 年代相对短的毒株。 env基 不同地区小型猪的PERV的进化关系，如下图。从进化树分析的结果来看，国内三种小型猪的PERV