影响谷氨酸发酵的关键——发酵过程中菌体生长的同步化研究.pdfVIP

影响谷氨酸发酵的关键 ——发酵过程中菌体生长的同步化 赵颖娟陈 宁 (天津科技大学生物工程学院天津300222) 王健 (吉林大学生物与农业工程学院吉林长春130000) 摘要本文根据谷氨酸发酵行业中所面临的发酵产酸率低、糖酸转化率低等问题，提 出了发酵过程中茵体同步培养对谷氨酸发酵的影响，重点描述了茵体同步培养的理论基础 和方法、细胞同步化程度的测定以及同步化培养在谷氨酸发酵过程中应用展望。 关键词 同步培养 同步率 1引言 味精工业作为一门传统产业在我国经过几十年的发展，已经取得大成绩，但 是和世界先进水平相比还有一定的差距，主要表现在发酵产酸率低、糖酸转化率 低等。如何创造更经济、更有效的方法，来提高味精生产过程的经济性和产品的 市场竞争力，已经成为目前所关注的焦点问题。 众所周知，谷氨酸发酵的关键在于发酵培养期间谷氨酸生产菌细胞膜结构 与功能上的特异性变化，使细胞膜变成有利于谷氨酸向膜外渗透，即完成由谷氨 酸非积累型细胞向谷氨酸积累型细胞的转变…1。这样，由于终产物谷氨酸不断 地排出细胞外，使细胞内的谷氨酸不能积累到引起反馈调节的浓度，谷氨酸就会 在细胞内继续不断地被优先合成，又不断地透过细胞膜，分泌到发酵培养基中， 从而得以大量积累。已知谷氨酸发酵中菌体形态的变化，大致可分为长菌型细 胞、转移期细胞和产酸型细胞三种不同时期的细胞形态。根据众多谷氨酸生产 厂家的生产实际可以看出，当谷氨酸产生菌完成由生长型细胞向产酸型细胞的 转变后，尽管发酵液中大部分细胞为产酸型细胞，但仍然存在一些未完成转型的 生长型细胞。随着后期补糖的进行，所流加的营养成分仍然能保证这些未转型 细胞继续进行再次分裂，发酵过程呈现长菌体、耗糖快、耗氨快、产酸低或糖酸转 化率低等现象，这些未转型的细胞实际上与杂菌存在无异。其出现的原因为细 胞培养不同步所致。不论亚适量工艺还是强制发酵工艺，都要求控制点后菌体 进行再度倍增，如菌体生长不同步，则必有未转型细胞存在。因此，在转型期间 · · 15 细胞的同步化问题是谷氨酸发酵工艺中必须注意的问题。 2微生物细胞同步培养的理论基础和方法 同步培养是指培养液中的微生物细胞的生理状态比较一致，生长发育处于 同一阶段，即同时进行分裂一生长一分裂的培养方法。通过同步培养得到的细 胞群体，既控制了细胞分裂的速度，改善了细胞间的均一性，又使全部细胞处在 细胞分裂周期的同一阶段上，使同步生长群体与个体行为基本一致，提高了细胞 群体的均一性。 细胞群体在自然过程中形成的细胞周期同步化，叫做自然同步化；通过人为 处理所形成的细胞周期同步化，叫做人工同步化。基于自然同步化的不确定性 和低效性，更多的研究细胞群体的人工同步化方法。获得微生物细胞同步生长 的方法有多种，最常用的有选择法和诱导法两种。 2．1选择法 选择同步法主要是依据细胞的物理性质，如大小、密度、形状、表面电荷差异 等，通过过滤、密度梯度离·fl,、膜吸附和直接选择等方法，从分批生长的细胞群体 中选择出处于同一生长阶段的细胞来培养的方法【3J3。多数情况是专门选择细胞 分裂后子细胞形态有明显变化的那一生长阶段。常见的过滤法、密度梯度离心 法、膜吸附法均属于选择同步法。其中出现较早也较成熟的方法有差异沉降离 心法和平衡密度梯度离。1、5法。前者利用大小不同的细胞在蔗糖密度中迁移速率 的不同，而将不同生长阶段的细胞区分开来，这种方法可以在低速离心机上实 现。平衡密度梯度离心法是选用一种特殊的以蔗糖为单体的多聚物Fieoll 心(大于2000r／rain)后，不同密度的细胞将稳定于与之相当的密度范围内。图 1L4J和图2【4 J分别为细胞的随机生长曲线和经过密度梯度离心所得到的同步生长 曲线。 图1细胞随机生长曲线 ¨u¨n¨