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脑脊液检验 实验一 脑脊液理学检查 （目的） 掌握脑脊液理学检查的内容，方法。 （标本） 新鲜脑脊液。 （操作） 1．观察颜色 肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色，乳白色，红色，棕色，或黑色，绿色等文字如实描述报告。 2．观察透明度 肉眼观察脑脊液透明度变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况下可出现不同程度浑浊，可分别以“清晰透明”。“微浑”，“浑浊”等如实报告。3．观察凝块或薄膜 轻轻倾斜试管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形成凝块或薄膜，分别以“无凝块”，“有凝块”，“有薄膜”等如实报告。 （注意事项） 当标本颜色或透明度改变不明显时，应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观察，同时观察有无凝块。 怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在2~4℃环境中静置12~24h再观察脑脊液表面有无薄膜形成。 参考值 ：无色，清晰透明，放置后无凝块或薄膜形成。 实验二 脑脊液显微镜检查 （目的）掌握脑脊液显微镜检查的内容，方法。 （器材） 显微镜，改良牛鲍计数板，微量吸管。刻度吸管，小试管。 （试剂） 生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞—吉染液。 （标本）新鲜脑脊液。 （操作） 细胞总数计数 直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑脊液） 充池：微量吸管吸取混匀的脑脊液，充入血细胞计数板的上下2个计数池。 计数：静置2~3min，低倍镜下计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的细胞数。 计算：10个大方格内的细胞总数即为每微升脑脊液细胞总数，再换算 稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液） 稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进行一定倍数稀释。 充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液充入1个计数池。 计数：静置2~3后，低倍镜计数1个计数池内四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。 计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数，计算每升脑脊液的细胞总数。 白细胞计数 直接计数法（非血性清晰透明或微浑脑脊液） 除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴，混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。 充池： 计数： 计算： 稀释计数法（浑浊脑脊液） 稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。 充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液充入1个计数池。 计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格内的白细胞数。 计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数 白细胞分类计数 直接分类法 白细胞计数后，转换高倍镜，根据细胞的形态和细胞核形态进行直接分类，共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂片染色分类计数 涂片染色分类法 若直接分类不易区别细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min，取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后，油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细胞分类计数报告方式相同。若见激活型单核细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞（形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中 （注意事项） 直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再充池计数。 细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。 血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值 白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细胞数 细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。 涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏或HE染色查找肿瘤细胞。 实验结束后，血细胞计数板用0.75％（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免损坏计数板。 方法学评价 脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手工显微镜法。白细胞直接分类法简单，快速，但属粗略分类，其准确性差，且细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧性标本的细胞变形，分类更困难，误差较大。涂片染色分类法分类详细，结果准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如肿瘤细