人CCL5基因RNA干扰慢病毒载体的构建.pdfVIP

·174· ， -实验研究· 人CCL5基因RNA干扰慢病毒载体的构建 匡军秀王卫星孙圣荣 王万荣 【摘要】 目的、构建人CCL5基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法根据人CCL5基因 2．0质粒一起利用293T 信息，构建4个携带RNAi序列的pGCSIL—GFP质粒，与pHelper1．0、Helper 细胞进行慢病毒包装。用CCL5RNAi慢病毒载体感染人宫颈癌细胞(Hela)，使用RT—PCR方法验 证其干扰效率。结果4个靶点中有3个靶点(a1、a2、a3)在Hela细胞上对CCI．5基因的表达都有 非常显著的敲减效果，敲减效率均达到95％以上。结论构建的CCl5RNAi慢病毒载体在Hela 细胞中有较高的敲减效率，提示RNAi技术能够使细胞CCL5基因沉默。 【关键词】CCl5基因；RNA干扰；慢病毒载体；构建；敲减效果 ConstructionandidentificationoflentiviralvectoroftheRNAinterferenceofhumanCCL5 gene K叫ⅣG General Jun—xiu，黝ⅣG耽i—xing，SⅢSheng—rong，eta1．Departmentof Surgery，RenminHospital o厂珊历an 430060。China University．耽玩n Correspondingauthor：张^，G矸瓴一xing ob．iectiveToconstructalentiviralvectorofRNAinterferenceofchemokineCCmotif 【Abstract】 and itsknockouteffectivenessinHelaceHs．MethodsThe identify pGCSIL—GFP ligand-5(CCL5)gene which fourRNAi forhumanCCL5 plasmidsexpressed sequences(al，a2，a3，a4)respectivelygenetogeth— erwith 1．0and 2．0 weretransfectedinto293Tceilsinordertoconstructtentivi． pHelper Helperplasmids ralvectorsofRNAinterferenceofCCl5 thelentiviralvectorsweretransfectedintoHelacells． gene．Then andRT．PCRwasusedtoevaluateitsknockouteffectivenessforCCL5．ResultsTheknockouteffective— nessofa1．a2ora3was a4．whoseknockouteffectivenesswas 90％inHela beyond95％excepting beyond cells．ConclusionTheknockouteffectivenessoftheconstructedlentviralvectorsforhumanCCL5was resultsdemonstratedthatRNAiiSabletosilencethe CCL5inhuman satisfactory．0ur potentialkeygene cancercells． ccL5 RNA Knockout