大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体的构建与鉴定.pdfVIP

第 卷第 期第 页 华中科技大学学报(医学版) 4l 3 329 Vol.4l No.3 P.329 ! ! 年 月 !!!! !!!! 20l2 6 ActaMedUnivSciTechnolHuazhon Jun. 20l2 ! g ## 实验研究 # # 大鼠 阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原 6 基因双表达慢病毒载体的构建与鉴定$ % 逄坤芳! 陈鹤翔! 杨 辉 ! 卜慧莲! 刘希江 ! ! ! ! ! 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 武汉 430030 ! 摘要!目的 构建大鼠 阿片受体( )基因小发卡 ( )及人前脑啡肽原基因( ! 6 deltao ioidrecetorDOR RNA shRNA hu- p p )双表达慢病毒载体并鉴定 方法 根据大鼠 序列设计 并合成包 man reroenkehalin enehPPE DORmRNA shRNA ! p p p g 含正~反义靶序列的互补 链 退火后插入至 表达载体 / 中 构建 表达质粒 并转 DNA shRNA ENTR U6vector shRNA p 化至感受态细胞 抽提质粒后进行测序 合成 基因序列并插入到表达载体 ( )中 转化至感受 DH5 hPPE cDNA3.l + a p 态细胞 挑取多个单克隆进行测序验证 将 插入已构建成功的 / 载体中 再与慢病毒载 DH5 hPPE ENTR U6-shRNA a p 体 / 重组 构建慢病毒载体