大鼠尿素转运蛋白B基因克隆及真核表达载体的构建.pdfVIP

ChinJCritCareMed Dec.20l2 Vol.32 o.l2 ll 09 20l2 l2 32 l2 N 中国急救 医学 年 月第 卷第 期 论 著 B 大 鼠尿素转运蛋 白 基 因克隆及真核表达载体 的构建 ! ! ! ! 陈 凉 刘怕最 蒋吏如 张 征 潘曙明 09ZRl4l9600 基金项 目 上海市科委项目 200092 作者单位 上海 上海交通大学医学院附属新华医院 肾脏科 陈 凉 刘怕晨 蒋更如 张 征 急诊科 潘 曙明 l980- 男 主 作者简介 陈 凉 治医师 硕士研究生 l966- E-mail liuyisheng2002@ 通讯作者 刘怕晨 男 博士 主治医师 ! SD B ureatransporterB UT-B CDS 摘要 目的 克隆 大 鼠尿素转运蛋 白 的 全长基 因 S R c 并构建其真核表达载体 方法 从 D大 鼠肾髓质 中提取总 NA并经逆转 录反应获取总 DNA 以 cDNA为模板 PCR扩增 UT-B基 因的 CDS 区全长 片段 PCR产物加 A 尾后克 隆至 pMD- l8T 切后获取 UT-B T4DNA UT-B KpnI BamHI 克隆载体 双酶 片段 连接酶将 片段与 和 双酶 切 的真核表达载体 pcDNA3.l - 大 鼠 UT-B pcDNA3.l - -UT- 后 连接 构建 真核表达载体 B 果 成功克隆了 SD UT-B 的 pcDNA3.l - -UT-B 经 PCR 结 大 鼠 基 因 构建 载体 扩增 KpnI BamHI 切 鉴定及 测 序 验 证 表 达 载体 包 含 UT-B UT-B 与 和 双 酶 基 因 且 碱 基 序 列 GeneBank 中收录的大鼠 UT-B序列一致 结论 成功克 隆了该基 因并构建了其真核表达载体 pcDNA3.l - -UT-B 为进一步进行 UT-B基 因转染治疗尿毒症的研究奠定了基础 !关键词 尿素转运蛋 白 B UT-B