天然有机化学实验教学(实验绿原酸提取和预实验教学).docVIP

实验一 天然有机成分的预实验 实验目的：通过实验让学生了解中草药化学成分鉴别的基本原理，学会对各类化学成分检识的实验方法。掌握天然有机成分鉴别的操作流程。 实验原理：中草药中所含的化学成分很多，在分离提取某种临床上有效的药物之前，一般可先通过简单的试验（预试验，简称预试），初步了解其中所含成分的情况，这样将有利于先用适用的方法进行有效成分的探索试验。但必须指出，目前对中草药中成分的了解还很有限，随着时间的推移，必然会发现更多新类型的药用有效成分。预试结果仅能供分离有效成分作参考。 检查中草药化学成分的预试方法，主要归纳为二类。一类是系统预试法，即用简单的定性方法对中草药中的各类成分进行较全面的测定。为此，往往要同一种中草药中进行十多种乃至更多种的常见化学成分的定性实验。另一类是单项预试法，即根据工作的需要，有重点地检查某类成分。例如为了寻找强心药物，就利用强心苷的化学反应或药物实验，从多种中草药检查强心苷的存在情况。又如为了寻找甾体激素原料，则在多种中草药进行甾体皂苷及其苷元的定性反应等等。为了达到这一目的，需要选用灵敏而准确的定性反应，或采用新的技术（红外、紫外光谱、核磁共振、质谱、圆二色谱等）以及选用药理实验测定生物效价相配合的方法。 在研究中草药有效成分的工作中，常用系统预试法首先对其所含的成分作进一步的了解。这类方法一般多用粗提取物进行检查，由于某些定性反应有一定的局限性，故有时影响实验结果的正确判断。如有的定性反应为几类成分所共有，呈正反应时就难以确定是哪类成分生产形成的。同时由于成分之间的干扰，以及有时出现个别例外情况，所以虽有某类成分的存在，也可能呈负反应。目前常用的系统预试法有在试管内进行预试和圆形滤纸层析的方法等。 实验方法与步骤： 一、样品的制备 酸性乙醇提取液：称取通过20目筛的中草药粉末10克，加入70毫升0.5%盐酸乙醇溶液，在水浴回流10分钟。乘热过滤，得酸性提取液。此滤液用以检查酸性成分、有机酸和生物碱等。 水提取液：称取通过20目筛的中草药粉末10克，加入100毫升水，在室温浸泡过夜，滤取10毫升滤液，供检查氨基酸、多肽和蛋白质等。剩余药渣及浸液在60℃水浴中加热10分钟，立即过滤。此滤液供检查糖、多糖、皂苷、苷类和鞣质等。 甲醇提取液：称取通过20目筛的中草药粉末10克，加入70毫升甲醇，在水浴上回流10分钟，趁热过滤，滤液供检查黄酮及其苷类、蒽醌及其苷类、强心苷、香豆精及其苷类、内酯、挥发油、植物甾醇和油脂类等。 含物质色素、树脂较多的中草药，用颜色反应鉴别成分时，常常不易观察结果，因为这些物质对颜色反应干扰很大。为了避免这种干扰，可先用乙醚处理样品，即加入100毫升乙醚，在水浴上回流10分钟。过滤，乙醚提取液用圆形滤纸层析预试法检查内酯、酯类成分、游离香豆精、游离黄铜、游离蒽醌和挥发油等。经乙醚处理过的药渣，再按上法用甲醇提取，提取液供检查黄酮苷、强心苷、香豆精苷等 二、试剂的配置 1、重氮化试剂：对硝基苯胺0.35克溶于5毫升浓盐酸，缓缓倒入水中（配制试剂用水均指蒸馏水），并用水稀释至50毫升。另取亚硝酸钠5克溶于70毫升水中。临用前将两液等量混合，放在冰水中备用。 2、硅钨酸试剂（Bertread试剂）：称取硅钨酸5克溶于100毫升水中，加浓盐酸少量使呈酸性（pH2.0左右）。 3、碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂）：取次盐酸铋8克溶于17毫升30%硝酸（比重1.18）中，搅拌下慢慢滴加到含碘化钾27.2克的20毫升水溶液中。静置一夜，取上层清夜，加水稀释至100毫升。 4、碘化汞钾试剂（Mayer试剂）：二氯化汞1.35克与碘化钾5克，分别溶于60及30毫升水中。然后将两溶液均匀混合，再加水稀释至100毫升。 5、碱性酒石酸铜试剂（Fehling试剂）：甲液——硫酸铜结晶6.93克溶于100毫升水中。乙液——酒石酸钾钠结晶34.6克，氢氧化钠10克溶于100毫升水中，贮存于带橡皮塞的试剂瓶内。使用时取甲液和乙液等量混合。 6、氯化钠白明胶试剂：白明胶1克溶于50毫升水中（60℃水浴中加热助溶），加入氯化钠10克，完全溶解后，用水稀释至100毫升。 3,5二硝基苯甲酸试剂（Kedde试剂）：取1毫升2%的3,5二硝基苯甲酸乙醇溶液，7毫升水混匀，此溶液使用时配制。 碱性苦味酸试剂（Baljer试剂）：取9毫升1%苦味酸乙醇溶液，1毫升10%氢氧化钠乙醇溶液（不是碳酸钠）混匀。此溶液使用时配制。 三、化学成分的检查 （一）、酚类成分的检查 1、三氯化铁试验：取1毫升酸性乙醇提取液，加入1%三氯化铁乙醇溶液1-2滴，如有绿、蓝绿或暗紫色的反应，表明含有酚类成分。 2、重氮化试验：取1毫升酸性乙醇提取液，加入1毫升3%碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3分钟