基因重组大肠杆菌表达类人胶原蛋白诱导条件优化-中国科技论文在线.PDFVIP

中国科技论文在线 中国生物工程杂志 ， ， （）： E134: 3=O@14=5=.N (##6 (6 + (% P -( 基因重组大肠杆菌表达类人胶原 蛋白诱导条件优化研究! !! 马晓轩 范代娣 骆艳娥 米 钰 （西北大学化工学院 西安 !##$% ） 摘要 为了提高重组大肠杆菌’ ( 高密度发酵生产类人胶原蛋白的产量，分别研究了诱导时 机、乙酸浓度、诱导强度以及补氮方式对外源基因表达的影响，并对各因素进行了优化。采用补 料 分批式发酵，初始装液体积为 。最终细胞密度可达到 ，类人胶原蛋白的表达量为 ) $’ *+ ,-./ ’ 。结果表明：在对数生长的中后期进行诱导，尽量减少乙酸的积累量， 诱导 后降温 + ,$./ ’ +(0 -1 至-%0继续诱导，并采用每隔#234 补-$25 补料氮溶液的周期操作方式，有利于细胞的生长和 外源蛋白的表达。 关键词 重组大肠杆菌 高密度发酵 温度诱导 类人胶原蛋白 优化 胶原蛋白是一种广泛存在于骨、腱、软骨、皮肤 !#$%’#$’( #)*’ 内，经发酵、分离纯化后所得的重组 及其它结缔组织中的生物高分子。由于其具有生 蛋白命名为“类人胶原蛋白”，其水溶性、免疫排异 ［］ 物降解性、弱抗原性、生物相容性、促上皮细胞形成 + 性、成胶性等特性均优于天然胶原蛋白 。 等特性，已广泛应用于医学、美容、化妆品、保健品 在基因工程菌的发酵中，外源基因高表达条件 等行业。胶原蛋白可以膜、海绵、注射液、栓塞等形 下的高密度发酵对于提高生产效率、降低生产成 式应用于烧伤、创伤、眼角膜疾病、美容、矫形、硬组 本、简化产品纯化工艺都具有非常重要的意义。但 ［］ 织修复等方面 。 高密度发酵过程中容易出现菌体过早衰老、自溶和 ［］ 传统的胶原蛋白生产方法为动物提取法，但该 6 外源基因不能充分表达等现象 。因此，优化诱导 蛋白具有非水溶性、病毒传染性、异体免疫排异性 条件对提高外源蛋白的产量至关重要。 ［］ 及结构的弱加工赋型性( ，限制了许多潜在用途的 在本研究中，采用含有人源型胶原蛋白@7B8 开发。因此，对胶原蛋白进行改性就显得尤为重 的重组大肠杆菌进行补料 分批式发酵，考察了诱 ) 要。近年来，利用基因工程系统表达目的基因产物 导时机、诱