大熊猫粪便类固醇激素的保存时效性及检测准确性研究-西华师范大学.PDFVIP

第３７卷 第２期 西 华 师 范 大 学 学 报 （自然 科 学 版 ） ２０１６年６月 　 Ｖｏｌ３７ Ｎｏ２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＷｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ） Ｊｕｎ．２０１６ 文章编号：１６７３５０７２（２０１６）０２０１３１０６ 大熊猫粪便类固醇激素的保存时效性及 检测准确性研究 １ ２ １ １ １ １ 毕温磊 ，杨志松 ，陈　鹏 ，陈　超 ，冯菲菲 ，ＪａｃｏｂＲＯｗｅｎｓ， １ １ １ １ 侯　蓉 ，张志和 ，李明喜 ，齐敦武 （１．成都大熊猫繁育研究基地 四川省濒危野生动物保护生物学省部共建实验室，四川 成都　６１０８６１； ２．西华师范大学 生命科学学院，四川 南充　６３７００９） 摘　要： 对大熊猫类固醇激素的监测有助于了解其生存环境的状况，然而，野外采集的粪便样品的时间尚缺乏准 确估计，因此，样品中有效保存的时间与分析量是否对检测结果具有影响尚不得而知。为评估样品分析量和保存 时间对野生大熊猫粪便样品类固醇激素结果的影响，我们设置 ０５ｇ和０２ｇ两种样品分析量，以及模拟野外温度 （１３±２℃）环境下，进行连续３６０ｈ的检测分析。结果表明：不同样品分析量（即０５ｇ和 ０２ｇ）间差异显著（ｐ＝ ００００），且分析量越大检测结果越准确。雄性大熊猫的皮质醇可稳定保存４８ｈ（Ｆ＝６０８，Ｐ＜００５），睾酮未出现显 著性变化（Ｆ＝０８１３，Ｐ＞００５），结果在３６０ｈ内具有可比性；雌性大熊猫的皮质醇可稳定保存 ７２ｈ（Ｆ＝５９６，Ｐ＜ ００５），孕酮可稳定保存４８ｈ（Ｆ＝２３６５，Ｐ＜００５）。在实际应用中，对于非新鲜的大熊猫粪便样品应根据不同检测 目的在样品保存的有效期内进行类固醇激素的准确检测。 关键词： 大熊猫粪便；类固醇激素；野外环境；保存时效性；准确性 中图分类号：Ｑ９５５；Ｑ９５９８３８　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．１６２４６／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３５０７２．２０１６．０２．００２ 近年来，许多研究通过分析濒危野生动物类固醇激素的含量和变化情况实现对其繁殖、应激等生理水平 ［１６］ ［７］ 的监测 。与传统采集动物血液 、组织样品等方法相比，利用非损伤性取样方法（Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｓａｍｐｌｉｎｇ ［５，８］ ［９，１０］ ｍｅｔｈｏｄｓ） 获取动物粪便样品，对动物的干扰最小 ，成为分析动物类固醇激素水平的重要、可行途 ［１１１３］ ［１４］ 径 。从动物粪便样品中检测到的一般都是类固醇激素的代谢物，而不是源激素 ，这些代谢物容易受 ［１５］ ［１６，１７］ 到微生物的降解 ，野外环境的降雨、雪、日晒等均会加快降解反应 。因此，随着样品在环境中滞留时 间的增加，会使得其中的类固醇激素含量发生变化，影响动物粪便内的类固醇激素含量。而明确粪便样品中 类固醇激素含量随时间变化的情况，可以有效指导野外粪便样品的正确采集，从而得到更为准确科学的实验 结果。 在动物粪便类固醇激素的提取中，研究者通常取用少量的样品量进行类固醇激素提取的统计分析 （ ［１８］ ０２ｇ） 。通过取用０２ｇ棕熊（Ｕｒｓｕｓａｒｃｔｏｓｈｏｒｒｉｂｉｌｉｓ）粪便样品来验证季节、食物等对棕熊粪便糖皮质醇