大鼠小肠平滑肌.doc

实验三、消化道平滑肌的生理特性及其影响因素 实验时间：2010年11月2日 实验目的 观察哺乳动物小肠平滑肌的一般生理特性； 观察某些理化因素对小肠平滑肌的自律性活动和紧张性的影响； 学习哺乳动物离体小肠体外实验的方法。 实验原理 消化道平滑肌具有肌肉组织的共同特点，如兴奋（excitability）、传导性（conductibility）和收缩性（contractibility），还表现出自身的功能特点，如兴奋性较低，收缩缓慢；自动节律性（autorhythmicity）；具有一定的紧张性（tonicity）；具有较大的伸展性（extensibility）；对电刺激、切割、烧灼不敏感，但对于机械牵张、温度变化和化学刺激特别敏感。消化道平滑肌在离体后，置于适宜的环境中仍能进行节律性收缩（rhythmic contraction），对环境中各种理化因素，如环境的温度、酸碱度、渗透压、一些特殊的无机盐离子、某些生物活性物质以及供氧和牵拉等刺激敏感，这些刺激都可以改变消化道平滑肌的收缩活动，而表现为收缩的节律、强度、速度以及紧张性收缩等方面的改变。 实验器材 BL生物机能实验系统，机械-电换能器，恒温水浴灌流槽，温度计，台氏液，常用手术器械，1︰10000肾上腺素，1︰10000乙酰胆碱，1︰10000阿托品，1N NaCl，1N HCl； 大鼠。 实验步骤 标本制备：十二指肠向下取20～30cm的肠段，除去肠系膜及周围脂肪组织之后，用台氏液冲洗干净，保存于盛有室温台氏液的培养皿中备用； 固定：实验取2～3cm的肠段，用棉线结扎两端肠段的对角（注意应避免封闭肠管，保持肠管管腔能与溶液相通）。将此肠段一端通过铁勾固定在灌流槽的内槽底部（肠段与铁勾间的间隙应比较小，以免肠管摆动），内槽中的台氏液以刚能淹没肠管为宜。开启供氧装置供给标本氧气，以保持平滑肌的生理机能。另一端则通过棉线连接机械-电换能器的悬梁臂上，标本与换能器连线保持垂直，且松紧度适当，不要与灌流槽内壁接触； 实验装置：如图3.1。灌流槽分为内槽和外槽。内槽为浸浴实验标本用（槽内盛台氏液），内槽底部有一个开口，排放液体之用。另外内槽壁还附有一个铁勾，用于固定小肠平滑肌，与铁勾伴行的还有一个连接供氧装置，用于供给肠管活动所需要的氧气。外槽的上、下两端有两个开口，其下端开口连接恒温水浴的出水口，上端开口连接恒温水浴的进水口，开启恒温水浴的循环按钮后，恒温水浴内的水会自动循环，间接加热灌流槽内槽的液体，使内槽液体温度保持在37～38℃； 离体小肠平滑肌的正常收缩曲线：观察曲线的节律、幅度。收缩曲线的基线升高，表示小肠平滑肌的紧张性升高，反之则下降； 肾上腺素的作用：在内槽台氏液中加入1～2滴1︰10000肾上腺素； 乙酰胆碱的作用：加入1～2滴1︰10000乙酰胆碱； 阿托品的作用：加入1︰10000阿托品1～2滴，2分钟后再加1︰10000乙酰胆碱1～2滴，并与步骤6进行比较； 氯化钙的作用：1%CaCl 2 1～2滴； 环境pH值变化的影响：在内槽中加入HCl 1～2滴，显效后再加入NaOH 液 1～2滴； 温度的影响：将内槽换成25℃的台氏液，同时关闭恒温加热装置，使内槽台氏液 温度逐渐降至25℃，记录平滑肌收缩情况。同法加入45℃台氏液并记录曲线变化， 同时观察肠段紧张度。 实验结果 正常收缩曲线： 如图3.2，平滑肌收缩频率比较稳定，但是收缩幅度有节律性变化。 滴加肾上腺素 如图3.3，滴加2滴肾上腺素后，张力下降至原来的60％，收缩频率、幅度也都下降。 滴加乙酰胆碱 由图3.4可见，滴加1滴乙酰胆碱后，小肠平滑肌的张力立即急剧升高，超出了我们预先设置的量程。在看到明显效果后，我们立即进行换液冲洗，避免长时间刺激引起平滑肌的疲劳。 滴加阿托品 由图3.5可见，滴加阿托品后，平滑肌收缩没有明显改变，之后立即滴加乙酰胆碱，也不会引起上一步中的剧烈变化。再次验证了阿托品对乙酰胆碱的阻断作用。此时因为棉线与装置发生粘连，测得的曲线张力基值较低，波动幅度减小，只是测量问题，标本自身没有任何变化。 滴加氯化钙 如图3.6，滴加氯化钙后，收缩的幅度略微增大，张力则没有明显变化。而且有效的时间比较短。 改变pH 由图3.7（a）可见，降低环境pH时，小肠平滑肌没有明显变化。但是由（b）可见，在原基础上升高pH，则使平滑肌收缩基本停止，张力也几乎消失。再次降低pH后，收缩幅度、张力逐渐恢复。 改变温度 因为我们改变温度时采取的方法时内外液全部换掉，所以耗费时间较长，不易在同一张图内与37℃时的曲线相对比，因此只做出了改变温度后的收缩曲线。尽管如此，已经可以明显看到实验结果。由图3.8（a）可见，降低温度至25℃后，平