1例男性性逆转综合征的遗传学研究.docVIP

精品论文 参考文献 1例男性性逆转综合征的遗传学研究 孔舒1 , 2 　孙筱放1 , 2 　李少英1 , 2 　黎青1 , 2 （通讯作者） (1广州医学院第三附属医院妇产科研究所实验部 510150；2.广州市生殖与遗传实验部广东广州 510150) 【摘要】目的　对一例男性性逆转综合征的研究。方法 外周血染色体检查以及MLPA方法的Y位点基因检测，确诊此病例为男性性逆转综合症。结果 46， XX男性多因婚后不育就诊，需尽早做出正确诊断，可利用产前诊断技术避免此类患儿的出生。 【关键词】性逆转　染色体　MLPA 【中图分类号】R394.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）05-0196-01 性逆转综合征(sex reversal syndrome)是一类罕见的两性畸形，不同于真假两性畸形。临床上十分罕见，鉴别诊断困难，容易误诊。男性性逆转的发生率为1／30 000～1／20 000，46，XX男性多因婚后不育就诊，所以及时诊断及干预非常重要。随着细胞遗传学和分子遗传学的发展，性逆转综合征的相关研究也越来越多。 1　材料和方法 1.1材料　不孕不育科的一男性社会性别的标本，婚后不育，性激素检查促性腺激素和卵泡生成素均高于正常男性水平；精液检查，未见精子。 1.2方法　用１６４０培养基在３７℃恒温培养箱中无菌培养人体外周血淋巴细胞７２ｈ，在细胞进行到分裂高峰的中期加入秋水仙素终止液，经过低渗、固定、玻片处理、滴片、Ｇ显带技术等一系列过程，制作出染色体标本。 1.3核型分析　在蔡司自动分析仪下至少计数100个分散好的中期分裂相，同时进行分析，结果均为46,XX。见图1 图1男性性逆转染色体核型图 1.4 样本按SALSA MLPA kit P095-A2 Aneuploidy说明书进行操做, Genescan 310软件进行定量分析,结果如下：见图2。 2　结果 此病例为男性性逆转综合症。 3　讨论 多重连接依赖式探针扩增MLPA方法由荷兰学者Schouten等于2002 年建立[1]。他是利用简单的杂交、连接、PCR扩增反应，于单一反应管内同时检测最多40个不同的核苷酸序列的拷贝数变化。原理是针对不同检测序列设计多组专一的探针组，然后对探针组进行扩增，每组探针组长度不同，可与目标序列杂交黏合。所有探针的5端都有通用引物结合PBS(primer binding sites)，3端都有与待扩增目标序列结合区，在PBS 区与目标序列结合区之间插入不同长度的寡核苷酸，由此形成长度不的探针组。如果目标序列缺失、突变，则这组探针无法成功连接，也没有相应的扩增反应。如果某组探针可与目标序列完全黏合，则连接酶会将这组探针连接成为一个片段，并通过标记的通用引物对此连接在一起的探针组进行扩增。最终经过毛细管电泳和激光诱导的荧光标志物来检测扩增产物。 M L P A技术在染色体病领域有广泛的应用价值[2,3]。染色体是遗传物质的载体，染色体形态结构或数量上的异常引起的疾病为染色体病， 如唐氏综合征、18一三体、13-三体、x、Y染色体数目异常等。常规的检测方法是通过采取外周血、羊水细胞、绒毛或其他胎儿细胞经常规培养后，采用G显带方法对分裂期细胞进行染色体核型分析而诊断。在产前诊断中，由于产前诊断标本培养时间长，受影响的因素多，我们应该结合ML PA技术，通过特异性探针定位，可以对探针特异性识别的靶序列进行定量分析，可以快速出针对性报告，培养结果作为最后的“金标准”。在46,X X男性逆转病人的研究发现，约10％的患者没有检测到Y 片段，包括S R Y基因[4]。在能够检测到S R Y的X X男性中，约80％的病因可能和Yp-Xp末端易位有关[5]。在46，X Y个体中，S RY基因的缺失导致男性向女性的性反转，可能是46，X Y女性患者父方配子在减数分裂时，P-Yp DNA同源交换，Y染色体包含SRY基因的P-YpDNA丢失[6]。此例病人的Y q11.21是缺失的,他的Y p11.21是存在的，但由于所含片段少，不被外周血染色体检查检测出，其主要表现为促性腺激素水平均升高，睾酮水平低或处于正常下限值，精液常规示无精症。产前诊断工作是可行且必要的,我们医院已经将羊水快速诊断的MLPA技术与羊水细胞培养相结合，一旦早期诊断可避免此类胎儿的出生，减轻胎儿出生后给家庭和社会带来的负担。 参考文献 [1] SCHOUTEN J P，MCELGUNN C J，WAAIJER R，et a1．Relativequantif