的表达与抗肿瘤活性.PDFVIP

微生物学通报 Apr. 20, 2014, 41(4): 607−613 Microbiology China © 2014 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130263 研究报告 大肠杆菌Nissle1917 L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大肠杆菌BL21 中 的表达与抗肿瘤活性 梁毅偈 孙运军 胡胜标 颜富 张旭 白利明 张友明 丁学知 夏立秋* (湖南师范大学 生命科学学院 微生物分子生物学国家重点实验室培育基地 湖南 长沙 410081) 摘 要：【目的】从大肠杆菌Nissle1917 中获得L-天冬酰胺酶Ⅱ基因，并研究其抗肿瘤活性。 【方法】以大肠杆菌Nissle1917 基因组为模板PCR 扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因，克隆至可诱导 表达载体pET28a 上。将L-天冬酰胺酶Ⅱ表达载体pET28a-asp 转化至大肠杆菌BL21(DE3) 中 并通过IPTG 诱导表达，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)和液相色谱-质谱(LC-MS)对表达 的L-天冬酰胺酶Ⅱ进行鉴定，并通过镍柱亲和层析纯化收集表达出的L-天冬酰胺酶Ⅱ。用纯 化定量以后的 L-天冬酰胺酶Ⅱ作用小鼠乳腺癌4T1 细胞、人肝癌Hep-3B 细胞和人脐静脉内 皮细胞 HUVEC 。【结果】来自于大肠杆菌Nissle1917 的 L-天冬酰胺酶Ⅱ基因可在大肠杆菌 BL21 中高效表达并通过LC-MS 得到鉴定，细胞毒性实验结果表明L-天冬酰胺酶Ⅱ对4T1 细 胞和Hep-3B 细胞的生长具有较强的抑制作用，而对人脐静脉内皮细胞HUVEC 的生长无明显 抑制效果。【结论】来源于大肠杆菌Nissle1917 的L-天冬酰胺酶Ⅱ能显著抑制4T1 细胞和Hep-3 肿瘤细胞的生长，而对人正常组织细胞的生长无明显抑制效果，为进一步研究L-天冬酰胺酶 Ⅱ特异性抗肿瘤作用机制和对实体瘤的应用研究奠定了重要基础。 关键词：L-天冬酰胺酶Ⅱ，大肠杆菌，克隆，抗肿瘤 Expression of Escherichia coli Nissle1917 L-asparaginase Ⅱ-encoding gene in E . coli BL21 and anti-tumor activity LIANG Yi-Jie SUN Yun-Jun HU Sheng-Biao YAN Fu ZHANG Xu BAI Li-Ming * ZHANG You-Ming DING Xue-Zhi XIA Li-Qiu (State Key Laboratory Breeding Base of Microbial Molecular Biology, College of Life Science, Hunan Normal University, Changsha, Hunan 410081, China) Abstract: [Objective] To study the anti-tumor activity of L-asparaginase II (ASP) of Escherichia coli Nissle1917. [Methods] L-Asparaginase Ⅱ gene was amplified from the genome of E . coli