风疹病毒E1膜抗原的原核表达与纯化鉴定.PDFVIP

第 39 卷　第 1 期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 Vol. 39 , No. 1 2003 年 3 月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QIN GDAO UNIVERSITATIS March 　2003 风疹病毒 E1 膜抗原的原核表达与纯化鉴定 钱冬萌 　卢 　宁 　闫志勇 　王 　斌 ( ) [摘要] 　①目的 　重组表达风疹病毒 RV E1 膜蛋白的抗原决定簇多肽 ,探索制备用于 RV 血清学检测的基 ( ) 因工程抗原。②方法 　通过反转录聚合酶链反应 RTPCR 扩增 RV E1 膜蛋白 212 ～241 位氨基酸的编码基因片 段 nt 8 886～8 976 ,将此片段重组于质粒载体p GEX4 T2 上 ,在大肠杆菌中表达目的多肽片段与谷胱甘肽巯基转移 ( ) 酶 GST 的融合蛋白 ,纯化融合蛋白并经 WesternBlot 鉴定其抗原性。③结果 　有效地表达出相对分子质量约为 33 000的融合蛋白 ,经 WesternBlot 检测结果证实可与 RV 的单克隆抗体发生特异性结合反应。④结论 　在原核表 达系统中有效地表达了保留风疹病毒抗原性的融合蛋白 ,为今后进一步研制 RV 重组抗原提供了方法学和实验室 基础。 [ 关键词] 　风疹病毒 ;膜蛋白质类 ;基因表达 ;重组融合蛋白质类 ( ) [ 中图分类号] 　R371. 1 　　[文献标识码] 　A 　　[文章编号] 　1001 - 4047 2003 01 - 0031 - 04 EXPRESSION, PURIFICATION AND IDENTIFICATION OF RUBELLA VIRUS E1 MEMBRANE ANTIGEN 　QIA N Dongmeng , L U Ni ng , YA N Zhiyon g , et al 　Department of Microbiolo gy , Qingdao University Medical College , Qingdao 266021 [ ABSTRACT] 　Objective 　To express rubella virus ( RV ) membrane antigen in E. coli. for the purpose of studying the deve lopment of RV antigen for serological assay. 　Methods 　The target gene (nt 8 886 - 8 976) encoding E1 212 - 242 amino acid residues were amplified by RTPCR , then cloned into the plasmid p GEX4 T2 , which contained the coding sequences of GST. The recombinant α plasmid was transferred into E. coli. DH5 and GSTE1 fusion proteins were expressed when induced by IPTG. Affinity chromato graphy was then employed to purify the fus