香蕉的基因工程研究进展(1).pdf

180 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 香蕉的基因工程研究进展 黄永红，易干军’，周碧容，曾继吾，吴元立 (广东省农业科学院果树所广州510640) 摘 要：香蕉是世界上一种重要的作物。近几十年香蕉生产受到了严重的病虫害威胁。大多数商业性 香蕉生长周期长。本身具有不育和多倍体特性，因此，传统育种方法在培育抗病、抗虫，优质的香蕉品种 方面很难得到广泛应用，从而影响了整个香蕉产业的健康发展。近年来。快速发展起来的基因工程技术为 培育具有优良性状香蕉品种提供了一种可行的手段。目前。遗传转化技术得到很大改进．转化受体也趋于 多样化，香蕉遗传图谱的构建正在进行，这必将使得香蕉品种改良得到快速发展，进而推动整个香蕉产业 进入一个新的阶段。 香蕉是世界上重要的粮食作物。产量继水稻、小麦和玉米之后列第四位。据联合国粮农组织 蕉为热带地区的人们提供了重要的食物保障，同时，也为农民提供了可观的收益fl】。目前，香蕉生产 受到严重的病虫危害，包括香蕉束顶病毒(‰以bunchytop similes)，香蕉细菌性枯萎病毒(Ralstoniasolanacaearum)，香蕉叶斑病(Mycospharellafijiensis)和香蕉枯 萎病(Fusarium 而且大多数食用品种具有不孕的特性，所以，尽管香蕉是发展中国家重要的粮食作物，但是具有重要 商品性的香蕉品种并不能通过传统育种方法而获得改良[11。遗传转化技术的发展为把具有重要农艺性 状的基因导人香蕉品种提供了有效的方法。虽然目前还没有获得释放的商品转基因品种，但是一些研 究组已报道获得了转基因香蕉[3-7]。本文就香蕉基因工程的进展进行综述，包括香蕉的植株再生、基 因克隆和遗传转化几个方面。 l 植株再生 遗传转化的一个重要前提条件是建立高效的植株再生体系。作为一种成熟的技术，香蕉作物的组 织培养已经广泛地应用到生产实践中。但是作为外源基因的受体，香蕉遗传转化中应用外植体与一般 增殖培育中应用的的外植体不尽相同。某些香蕉基因型的愈伤组织、细胞和原生质的器官发生已有报 道限9．姗。但是，这些外植体再生植株速度慢，而且有基因依赖性。因此，在香蕉遗传转化中，应用 香蕉横切薄片再生植株可能是细胞悬浮和原生质培养之外的另一种有益的选择。 1．1横切薄层培养 细胞薄层培养是二十世纪发展起来的行之有效的实验技术。1973年，Tran[1ll以烟草表皮细胞为 材料，获得了花、芽、根和愈伤组织的分化，这是细胞薄层培养技术最早应用的实例。后来，这项技 术应用到1—2mm厚的植物横切薄片的组织培养，进而应用到一些植物的遗传工程中旧Bl。 1996年，Okole 官发生和愈伤组织器官发生的研究。在芽诱导增殖培养基上，平均每个外植体上可以诱导出15芽， 并能够成功地再生成小植株。在愈伤组织诱导培养基上，横切薄片也能诱导出胚性愈伤组织，最终平 幸通讯作者．Authorfor correspondence．020-E—maihYiganjun@vip．163．corn 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 181 均每个横切薄片可以再生5—6个植株。愈伤组织和芽的形成与外植体的部位、发育阶段和不同的基因 型)’植株再生及其影响因素。通过正交试验和单因子试验确定了最佳培养条件，筛选出了五种最佳 培养基：直接器官发生培养基、愈伤组织诱导培养基、愈伤组织继代培养基、分化培养基、成苗培养 基。并要求愈伤组织诱导和继代培养需在黑暗中进行。最佳培养基实验结果表明，直接器官发生出芽 愈伤组织诱导出不定芽，平均每块愈伤组织诱导出的不定芽数为4．3。2003年，陈廷素[io-]以香蕉横 切薄层切片为材料，研究了不同因素对薄层切片芽分化的影响。结果表明，利用横切薄层培养技术能 更有效、快速地进行香蕉的无性繁殖。TDZ对香蕉薄层切片芽的分化有抑制作用，没有得到生长正常 的不定芽；横切薄层切片在暗培养且培养温度为30℃时比25℃有较高的不定芽分化率，不定芽分化 能力强，丛芽多；蔗糖和AgNO，对薄层切片芽分化有一定的影响。 1．2胚性细胞悬浮 体细胞胚胎发生技术最初是作为大量微繁和遗传改良(遗传转化和细胞质融合)的细胞工具而发 展起来的。这些技术是基于合成性的生长调节剂